GM-CSF及其受體在食管癌中的表達及作用研究.pdf

1、[研究目的]
　　粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granolocyte-macrophage-colony stimulatingfactor，GM-CSF)是血液系統(tǒng)最常見的生長因子之一，其與特異性受(GMCSFR)體結(jié)合后可促進血細胞的分化和成熟、促進機體免疫功能的發(fā)揮。研究表明，GM-CSF在多種惡性腫瘤如頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌中表達上調(diào)，并可通過免疫依賴和非免疫依賴兩種途徑調(diào)控腫瘤生長和進展，但其在食

2、管癌中的研究較少。據(jù)此，本研究擬從蛋白和組織水平探究GM-CSF及其受體在食管癌中的表達情況，并從基礎(chǔ)實驗和臨床回顧性分析水平明確GM-CSF在食管癌中的作用。
　　[研究方法]
　　1.GM-CSF及其受體在食管癌中的表達水平檢測
　　1.1通過蛋白質(zhì)印跡(WB)檢測食管癌Eca109細胞和9706細胞GM-CSF及其受體表達水平;
　　1.2采用免疫組織化學試驗(IHC)檢測食管癌病理標本中GM-CSF及其受

3、體表達水平，根據(jù)染色強度和染色面積進行評分，依次將其分級為陰性、低表達和高表達;
　　2.GM-CSF在食管癌中的作用研究
　　2.1外源性GM-CSF刺激對食管癌Eca109細胞生物學行為的影響
　　2.1.1應(yīng)用Cell Counting Kit-8(CCK-8)實驗，比較GM-CSF刺激組和對照組Eca109細胞在24h、48h、72h和96h的增殖能力差異;
　　2.1.2采用流式細胞術(shù)，探究GM-CSF

4、刺激組和對照組Eca109細胞凋亡能力的差異;
　　2.1.3通過計數(shù)細胞穿過Transwell小室基膜的數(shù)量評估GM-CSF刺激組和對照組Eca109細胞遷移和侵襲能力的不同;
　　2.2 GM-CSF在放療中變化水平對治療效果的預測作用
　　2.2.1應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測食管癌患者在放療過程中血清GM-CSF水平的變化，Log-Rank檢驗分析其與預后的關(guān)系;
　　2.2.2應(yīng)用Cox比例風

5、險模型分析GM-CSF變化是否為獨立預后因素。
　　[實驗結(jié)果]
　　1.GM-CSF及其受體在食管癌中的表達水平
　　1.1通過WB檢測發(fā)現(xiàn)GM-CSF在Eca109細胞和9706細胞中均有一定程度表達，GM-CSFR在Eca109細胞中表達陽性，9706細胞中表達較低(p＜0.05);
　　1.2本研究共分析93例食管癌患者病理標本，其中GM-CSF陽性率為100％，41例為高表達，52例為低表達，GM-CS

6、FR陽性率為55.9％，其中45例為高表達，7例為低表達，41例為陰性;
　　2.GM-CSF的抗腫瘤作用研究
　　2.1外源性GM-CSF刺激對食管癌Eca109細胞生物學行為的影響
　　2.1.1 Eca109細胞在GM-CSF刺激后72h(p=0.001)和96h(p=0.003)增殖能力較對照組明顯降低，但在24h和48h兩組細胞的增殖能未見顯著差異(p＞0.05);
　　2.1.2 Eca109細胞在加

7、入GM-CSF的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時后，凋亡細胞數(shù)較對照組無明顯變化(p＞0.05)，提示GM-CSF對凋亡可能無影響;
　　2.1.3 Eca109細胞在GM-CSF刺激后穿過Transwell小室基膜的數(shù)量較對照組明顯下降(p＜0.05)，證明其可顯著抑制細胞的遷移和侵襲能力;
　　2.2血清GM-CSF在放療中變化趨勢對治療效果的預測
　　2.2.1研究共分析54例食管癌患者，23例在治療過程中血清GM-C

8、SF水平上升，31例下降，上升組總生存期(p=0.002)和無進展生存期(p=0.001)均明顯高于下降組;
　　2.2.2 GM-CSF變化為獨立預后因素(p=0.001，HR:0.244，95％CI:0.106-0.564)，且預后效應(yīng)強于疾病分期(p=0.001，HR:0.275，95％CI:0.127-0.596)。
　　[結(jié)論]
　　GM-CSF及其受體在食管癌中有一定表達水平。外源性應(yīng)用GM-CSF可顯著抑