黃連素對CA誘導(dǎo)的tau蛋白過度磷酸化的保護作用及其機制.pdf

1、黃連素，又稱小檗堿(Berberine,BR)，是從中草藥黃連等植物中提取分離得到的一類異喹啉類生物堿，屬季銨類化合物。近年來，有研究表明，鹽酸小檗堿在增加IL-1β和誘生型一氧化氮合酶的表達(dá)的同時能改善阿爾茨海默病(AD)模型大鼠的空間記憶損傷；通過改變阿爾茨海默病淀粉樣前蛋白的加工過程減少Aβ的分泌；過減少海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子來保護A β誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡；具有抗乙酰膽堿酯酶的活性而成為治療阿爾茨海默病的一種潛力藥物。由異常過

2、度磷酸化tau 蛋白構(gòu)成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFTs)含量與AD患者的臨床癡呆程度呈正相關(guān)，提示tau 蛋白過度磷酸化促NFT形成在AD發(fā)病中起關(guān)鍵作用。而受累神經(jīng)元內(nèi)蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶動態(tài)平衡失調(diào)是導(dǎo)致tau 異常過度磷酸化的主要生化機制。同時亦有報道：小檗堿可影響人類結(jié)直腸癌細(xì)胞(HCT-116cells)GSK-3β的活性，而后者是AD發(fā)病中起重要作用的一種蛋白激酶。但迄今為止，尚

3、無直接證據(jù)表明小檗堿影響AD 動物模型亦或是AD 患者腦內(nèi)蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶的活性，進(jìn)而影響tau的磷酸化程度。
　　 本文探討了小檗堿對花萼海綿誘癌素（CA）在人胚腎轉(zhuǎn)tau細(xì)胞（HEK293/tau）誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)絲過度磷酸化中的影響及其相關(guān)酶活性的變化。采用CCK-8 測定細(xì)胞活力來確定藥物作用濃度；并用顯微鏡成像和hoechst 觀察給藥前后的細(xì)胞狀態(tài)及凋亡情況。通過免疫印跡技術(shù)和細(xì)胞免疫化學(xué)測定tau 蛋白的磷酸化程

4、度及相關(guān)酶的活性。結(jié)果顯示：2.5nM CA作用12 小時可以使tau 蛋白在ser198/199/202、ser396/404位點的磷酸化程度明顯增高,并且GSK-3β活性明顯增加，PP-2A活性明顯下降。經(jīng)過24 小時濃度為20mg/ml的黃連素治療，這些位點的過度磷酸化有明顯降低，研究其作用機制發(fā)現(xiàn)GSK-3β在Tyr216位點磷酸化程度明顯下降，表明GSK-3β活性下降；同時PP-2Ac 在Y307位點磷酸化下降，表明PP-2A