Humanin拮抗岡田酸誘導的Tau蛋白過度磷酸化的作用研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文Humanin拮抗岡田酸誘導的Tau蛋白過度磷酸化的作用研究姓名：王丹申請學位級別：碩士專業(yè)：生理學指導教師：張策20070508元。在單獨加入不同濃度OA繼續(xù)培養(yǎng)24小時，以及提前加入不同濃度HN孵育24小時后再加入OA，用Westernblot方法檢測tau蛋白磷酸化程度的改變，以及GSK313表達水平的改變，并通過絲／蘇氨酸蛋白磷酸酶活性檢測試劑盒檢測PP2A活性的變化。結果：1原代細胞呈貼壁生長，一天后，

2、倒置顯微鏡下觀察細胞完全貼壁，形成橢圓形的芽胞狀，周圍有明顯的光暈，細胞折光性好，活性強。這時加入阿糖胞苷抑制膠質細胞的生長，并觀察細胞的增殖情況，依此決定阿糖胞苷的作用時間，得到純化的神經(jīng)元培養(yǎng)至12天細胞生長良好，胞漿透明，突起發(fā)育好，隨即加OA處理細胞。20A誘導的tau蛋白磷酸化及唧的拮抗作用觀察：(1)不同濃度0A對神經(jīng)元影響的鏡下觀察：加入不同濃度OA繼續(xù)孵育24d時以后，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：5riM組細胞同對照組相比無明

3、顯改變，細胞周圍有明顯的光暈，細胞折光性好，活性強；而10nM組中細胞突起有明顯回縮，神經(jīng)纖維網(wǎng)絡也較對照組減少。20riM組中多數(shù)細胞胞體呈圓形，突起消失明顯，死細胞明顯增多。(2)OA對tau蛋白磷酸化的檢測：OA處理以后，利用免疫印跡對大鼠皮層神經(jīng)元中tau蛋白不同位點的磷酸化進行檢測，結果發(fā)現(xiàn)tau蛋白在絲氨酸396、199／202及蘇氨酸231位點上出現(xiàn)過度磷酸化。其中5nMOA組磷酸化水平與對照組比較無顯著性差異(尸005)