血管活性腸肽VIP對人結(jié)腸細(xì)胞系HT-29AQP8表達(dá)的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：檢測在體外培養(yǎng)的人結(jié)腸上皮細(xì)胞系HT-29細(xì)胞水通道蛋白-8(AQP8)的表達(dá)情況，并研究血管活性腸肽(VIP)對其表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，明確VIP參與腸道水轉(zhuǎn)運(yùn)的作用是否與AQP8的表達(dá)異常有關(guān)，探討腸道水代謝的分子生物學(xué)機(jī)理，為臨床治療水代謝紊亂疾病提供一定的理論依據(jù)。 方法：采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Fluorogenic probe quantitative reverse transcription-polyme

2、rase chain reaction，F(xiàn)Q-RT-PCR)的方法測定VIP誘導(dǎo)的不同時間HT-29細(xì)胞AQP8 mRNA的表達(dá)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法測定VIP誘導(dǎo)的不同時間HT-29細(xì)胞AQP8蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：在人結(jié)腸上皮細(xì)胞系HT-29細(xì)胞中AQP8 mRNA和蛋白都有表達(dá)。VIP誘導(dǎo)3h時AQP8蛋白和mRNA表達(dá)增高，并達(dá)峰值，此后逐漸下降。VIP誘導(dǎo)3h組HT-29細(xì)胞AQP8 mRNA的表達(dá)顯著高于對照組和

3、VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組(p<0.001)。VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組與對照組AQP8 mRNA表達(dá)差異均無顯著性(p>0.05)，VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組之間AQP8 mRNA表達(dá)差異亦無顯著性(p>0.05)。VIP誘導(dǎo)3h組HT-29細(xì)胞AQP8蛋白的表達(dá)顯著高于對照組和VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組(p<0.001)。VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組與對照組AQP8蛋白表達(dá)差異均無顯著性(p>0.05)，

4、VIP誘導(dǎo)6h、12h、24h組之間AQP8蛋白表達(dá)差異亦無顯著性(p>0.05)。 結(jié)論：1.AQP8主要在人結(jié)腸細(xì)胞膜豐富表達(dá)，胞漿內(nèi)也有少量表達(dá)。2.VIP作用下的HT-29細(xì)胞AQP8mRNA和蛋白的表達(dá)均增加。 3.VIP對AQP8的表達(dá)可能是短期快速調(diào)節(jié)。VIP作用下AQP8表達(dá)在3小時時增高，并達(dá)峰值，此后至24小時呈逐漸下降趨勢，說明VIP對其的調(diào)節(jié)作用是快速的。AQP8是雙向水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在VIP促進(jìn)水和電解質(zhì)分