TRPC6通道對(duì)食管鱗癌的增殖及放療增敏作用的研究.pdf

1、本文從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 TRPC6通道對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株Eca109細(xì)胞周期的影響
　　目的:探討TRPC6通道對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株Eca109細(xì)胞周期的影響。
　　方法:(1)流式細(xì)胞儀分析TRPC6通道阻斷劑SKF96365阻斷TRPC6通道后對(duì)食管鱗癌Eca109細(xì)胞周期的影響;(2)用Ad-DNC6轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞后，采用流式細(xì)胞分析的方法探討阻斷TRPC6表達(dá)后Eca109細(xì)胞周期的變化;(

2、3)轉(zhuǎn)染Ad-DNC6阻斷或下調(diào)TRPC6通道后，采用Western blot技術(shù)檢測(cè)與細(xì)胞G2/M期密切相關(guān)的pY15-cdc2蛋白和cyclinB1蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:(1)用SKF96365預(yù)處理Eca109細(xì)胞后，隨著孵育時(shí)間延長(zhǎng)，處于G2/M期的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加，處于G0/G1期的細(xì)胞逐漸下降，且這種趨勢(shì)呈時(shí)間依賴(lài)性;(2)用DNC6轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞阻斷TRPC6后，處于G2/M期的細(xì)胞數(shù)目明顯增加，而處于G

3、0/G1期的細(xì)胞數(shù)目明顯下降，和對(duì)照組相比有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);(3) TRPC6通道阻斷后，細(xì)胞G2/M期相關(guān)蛋白pY15-cdc2和cyclinB1表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:阻斷TRPC6通道導(dǎo)致Eca109細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，說(shuō)明通過(guò)TRPC6通道調(diào)控的鈣離子內(nèi)流可能在食管鱗癌細(xì)胞G2/M期轉(zhuǎn)換過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　第二部分 TRPC6通道阻斷劑對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞放療增敏的研究
　　目的

4、:探討TRPC6通道阻斷劑SKF96365對(duì)腫瘤細(xì)胞Eca109放療增敏的影響。
　　方法:(1)采用流式細(xì)胞分析的方法了解TRPC6通道阻斷劑SKF96365對(duì)Eca109細(xì)胞周期的影響。(2)根據(jù)流式細(xì)胞分析的結(jié)果，在5μM SKF96365作用8小時(shí)后對(duì)Eca109細(xì)胞進(jìn)行放療，并用CCK-8方法檢測(cè)細(xì)胞活性及增殖能力。
　　結(jié)果:食管癌Eca109細(xì)胞在5μSKF96365作用下4小時(shí)就可以出現(xiàn)細(xì)胞周期的改變，G2/

5、M期升高7.79％，SKF96365作用6小時(shí)和8小時(shí)G2/M期分別升高約31.65％、49.95％，G1期細(xì)胞明顯下降，且沒(méi)有細(xì)胞凋亡的發(fā)生。在這一時(shí)間點(diǎn)對(duì)單純照射組、SKF96365+照射組Eca109細(xì)胞進(jìn)行放療，并用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞存活和生存情況。同時(shí)接受SKF96365孵育和放療的Eca109細(xì)胞OD450值最小，說(shuō)明細(xì)胞的增殖能力越差。
　　結(jié)論:TRPC6通道阻斷劑SKF96365對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株Eca109有明顯

6、放療增敏作用。
　　第三部分 TRPC6通道阻斷劑對(duì)食管鱗癌Eca109細(xì)胞成瘤裸鼠放療增敏的研究
　　目的:進(jìn)一步探討TRPC6通道在食管鱗癌放療增敏中的作用。
　　方法:用20只雄性BALB/c裸鼠，隨機(jī)分成4組，分別是:對(duì)照組、SKF96365組、單純照射組和SKF96365聯(lián)合放療組，每組5只。4組裸鼠均皮下注射Eca109食管鱗癌細(xì)胞7.5×105個(gè)細(xì)胞/200μ1。對(duì)照組在皮下注射腫瘤細(xì)胞后第5天開(kāi)始每天腹

7、腔注入100μl的生理鹽水，共7天;SKF96365組和SKF9635聯(lián)合放療組在皮下注射腫瘤細(xì)胞后第5天開(kāi)始每天腹腔注射5μM SKF9636520mg/kg，共7天;單純照射組和SKF96365聯(lián)合放療組在皮下注瘤后第7天開(kāi)始進(jìn)行放療，電子線(xiàn)7Mev，2Gy/d，共5天。觀(guān)察裸鼠一般情況，每周測(cè)量?jī)纱文[瘤的體積，計(jì)算各組裸鼠腫瘤體積之間的不同。在接種后第六周，處死動(dòng)物，拍照稱(chēng)重。
　　結(jié)果:裸鼠腫瘤體積的變化:用游標(biāo)卡尺先測(cè)量