TRPC6通過CREB在糖尿病痛性神經(jīng)病變中的作用.pdf

1、目的：
　　糖尿病痛性神經(jīng)病變（painful diabetic neuropathy，PDN）是一種發(fā)生在糖尿病患者中以機(jī)械刺激性疼痛為特點(diǎn)的疾病。長期糖尿病機(jī)械性痛(mechanical allodynia, DMA)對患者的生活造成了諸多不便。本實(shí)驗(yàn)以鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)大鼠建立糖尿病痛性神經(jīng)病變模型，研究經(jīng)典瞬時(shí)受體電位通道6（Transient Receptor Potential Ca

2、nonical，TRPC6）、下游cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）在模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglia，DRG）中的表達(dá)水平及藥物干預(yù)后的表達(dá)水平變化，及其與大鼠機(jī)械性痛覺敏感閾值變化的相互關(guān)系。旨在揭示PDN發(fā)病的分子生物學(xué)原理，為PDN的臨床治療及預(yù)防提供新思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　?。?）將50只清潔級、健康、

3、成年、雄性的斯普拉格-杜勒（Sprague-Dawley，SD）大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)將大鼠分為CON組6只、DM組44只，給予DM組大鼠STZ腹腔注射建立DM大鼠模型，CON組則僅予以相同劑量的檸檬酸鹽緩沖液；
　?。?）分別于造模前及造模后第3、7、14、21d測定大鼠血糖、體重與后爪機(jī)械性回縮閾值（paw withdrawal threshold，PWT）；
　　（3）第3d時(shí)，以血糖值≥16.7mmol/L為標(biāo)準(zhǔn)

4、篩選DM模型大鼠；
　?。?）第14d時(shí)，用von Frey絲測定大鼠PWT值的變化，按其比造模前基線值下降50％為標(biāo)準(zhǔn)篩選DMA模型大鼠；
　?。?）第15d時(shí)，給予CON組及DMA模型組大鼠行鞘內(nèi)置管術(shù)，術(shù)后連續(xù)肌內(nèi)注射青霉素預(yù)防性抗感染治療3天，并將DMA模型大鼠隨機(jī)分為三組（DMA組、DMA+溶媒組、DMA+SKF96365組），置管后第3天開始鞘內(nèi)注射SKF96365（65ng/kg），連續(xù)干預(yù)5天；
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5、6）分別運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測各DMA模型組及CON組大鼠DRGs中TRPC6、pCREB的 mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）造模前大鼠的血糖、體重、PWT基線值不存在明顯差異（P＞0.05）；
　　（2）STZ注射后第3d，DM組約89%的大鼠血糖顯著升高（血糖＞16.7 mmol/L），與CON

6、組相比，多飲、多食、多尿、消瘦等糖尿病三多一少癥狀明顯；
　?。?）STZ注射后第14d，DM大鼠約52%出現(xiàn)明顯的雙側(cè)后爪機(jī)械刺激性痛（即為DMA模型大鼠），PWT值較CON組顯著下降（P＜0.01），并持續(xù)降低至第21d（P＜0.01）；
　?。?）與CON組相比，DMA組大鼠DRGs中TRPC6與pCREB的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜0.01），DMA組與DMA+溶媒組大鼠DRGs中的TRPC6、pCREB的

7、mRNA和蛋白表達(dá)水平無明顯差異（P＞0.05），DMA+SKF96365組大鼠DRGs中TRPC6、pCREB的mRNA和蛋白表達(dá)水平較DMA+溶媒組有所下降（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　STZ誘導(dǎo)的DMA大鼠DRGs中TRPC6表達(dá)上調(diào)，與疼痛呈正相關(guān)，DMA+SKF96365組TRPC6表達(dá)下調(diào)，與疼痛的變化相一致，TRPC6可能參與了糖尿病機(jī)械痛的發(fā)病過程。TRPC6與pCREB表達(dá)水平變化相關(guān)，提示TRPC6