白頭翁醇提物對TNBS誘導大鼠結腸炎腸黏膜上皮細胞緊密連接蛋白保護作用的研究.pdf

1、目的：研究白頭翁醇提物對三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonic acid，TNBS）誘導大鼠結腸炎腸黏膜上皮細胞緊密連接蛋白的調控，進一步探討白頭翁醇提物對大鼠實驗性結腸炎的腸黏膜屏障的保護作用。
　　 方法：SD大鼠（雌雄兼?zhèn)洌?8只，分為四組：正常對照組（對照組，n=8）、TNBS模型組（模型組，n=10）、白頭翁醇提物治療組（白頭翁組，n=10）、金雙歧治療組（金雙歧組，n=10）。建立TNBS誘導

2、大鼠結腸炎模型：SD大鼠術前禁食24h，模型組、白頭翁組和金雙歧組用一直徑約2mm、長約12cm的硅膠管由肛門輕緩插入深約8cm，以含100mg/kgTNBS的等體積50％乙醇溶液緩慢注入結腸，讓動物保持肛門高位清醒，對照組則以等體積生理鹽水緩慢注入結腸。動物造模后，對照組和模型組第1～7天每只大鼠每天用1ml蒸餾水灌腸1次，并自由飲水；白頭翁組每只大鼠第1～7天每天用白頭翁醇提物灌腸，白頭翁醇提物用量按2g/kg用蒸餾水配制成1ml，

3、每天1次，并自由飲水；金雙歧組每只大鼠第1～7天每天用金雙歧2Co/只磨成粉末用蒸餾水配制成1ml灌腸，并自由飲水。每天觀察大鼠精神狀態(tài)、進食、活動、大便和體重等情況。于造模后第8天取眼眶靜脈血測定血內毒素，并斷頸處死所有大鼠，游離并取下整段結腸，沿腸系膜縱向剪開，清潔腸內污物后觀察結腸標本充血水腫情況、潰瘍大小、分布、有無活動性出血等情況；取1cm病變組織，行HE染色及免疫組織化學法檢測Occludin的表達，且進行疾病活動指數(shù)（DA

4、I）和組織學損傷評分；余下標本液氮凍存，用于ELISA法測定結腸組織中的TNF-a、IL-10。
　　 結果：①一般情況：在造模后24小時，模型組大鼠出現(xiàn)精神差，活動、飲食進一步減少，腹瀉伴肉眼便血或糞便隱血試驗陽性，第2～5天腹瀉最重，5～6天后血便逐漸減輕，食量恢復。白頭翁組、金雙歧組大鼠癥狀較模型組有明顯改善，于造模后24小時開始出現(xiàn)大便稀溏或不成形，血便多表現(xiàn)為隱血陽性，第2～3天腹瀉稍重，3～4天后腹瀉、血便逐漸減輕，

5、活動逐漸增多，食量慢慢恢復。在組織學上模型組結腸黏膜糜爛和潰瘍形成面積較大，多累及肌層，腺管扭曲、部分腺上皮不典型增生；白頭翁組、金雙歧組結腸黏膜糜爛和潰瘍形成面積較小，多累及至黏膜下層，腺管扭曲、部分腺上皮不典型增生不明顯；對照組大鼠結腸黏膜上皮完整，結構清晰，腺體排列規(guī)則，固有膜內杯狀細胞豐富，肌層無異常，偶有微量炎細胞浸潤。②疾病活動指數(shù)（DAD和組織學損傷評分：模型組、白頭翁組、金雙歧組和正常組DAI分別是9.20±1.75、6

6、.50±1.27、5.90±1.67和0.75±0.71；組織學損傷評分分別是7.10±0.99、5.00±1.05、4.80±1.23和0.25±0.46，與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），白頭翁組和金雙歧組之間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。③結腸組織TNF-a、IL-10和內毒素含量：TNBS誘導大鼠結腸炎后，結腸組織TNF-a，水平升高、IL-10水平降低和血清內毒素水平升高，而經(jīng)白頭翁醇提物和雙歧桿菌嗜酸乳

7、桿菌腸球菌三聯(lián)活菌處理后，結腸組織TNF-a，水平降低（657.54±149.60、521.24±109.38、514.73±163.47和205.40±72.49，P<0.05）、血內毒素水平降低（O.213±0.023、O.148±0.093、O.153±0.106和0.071±0.034，P<0.05）和IL-10水平升高（42.92±23.74、92.19±30.09、89.77±28.48和123.00±36.16，P<0.0

8、5），而白頭翁組和金雙歧組之間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。④結腸腸上皮細胞緊密連接蛋白Occludin的表達：模型組、白頭翁組、金雙歧組和正常組分別是25.80±10.28、50.70±17.02、52.40±16.15和81.62±1.39，與正常組比較，組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），白頭翁組和金雙歧組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 結論：白頭翁醇提物對TNBS誘導大鼠結腸炎腸黏膜屏障具有明顯的