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1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)耐藥的產(chǎn)生成為長(zhǎng)期治療慢性乙型肝炎成功與否的主要障礙。目前檢測(cè)HBV耐藥的方法多種多樣,但都因存在一些缺陷,其臨床應(yīng)用受到限制,例如靈敏度低、耗時(shí)長(zhǎng)、成本高等缺點(diǎn)。在本論文中,我們建立了一種可以同時(shí)檢測(cè)HBV拉米夫定(lamivudine, LAM)及阿德福韋(adefovir, ADV)耐藥突變株(rtM204V, rtM204I, rtA181T, rtA181V, rtN2
2、36T)的多重連接探針-實(shí)時(shí)熒光PCR( multiplex ligation-dependent probe real-time PCR, MLP-RT-PCR)方法。該方法結(jié)合了多重連接探針擴(kuò)增(multiplex ligation- dependent probe amplification,MLPA)技術(shù)的靈敏、特異、高通量和實(shí)時(shí)PCR方便快捷、實(shí)時(shí)檢測(cè)的特點(diǎn)。通過檢測(cè)臨床116例慢性乙肝患者DNA樣本對(duì)MLP-RT-PCR方法
3、進(jìn)行了方法性能評(píng)價(jià),其中檢測(cè)出LAM耐藥突變41例(35.3%),ADV耐藥突變17例(14.7%)及兩者共同耐藥突變5例(4.3%)。
檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)直接測(cè)序方法比較,MLP-RT-PCR檢測(cè)rtM204V、rtM204I、rtA181T、rtA181V和rtN236T的符合率分別為95.7%(111/116)、98.3%(114/116)、99.1%(115/116)、98.3%(114/116)和99.1%(115/1
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