中國碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌多位點序列分型及OXA酶分布研究.pdf

1、碳青霉烯類（Carbapenem）抗生素是治療由鮑曼不動桿菌（Acinetobacterbaumannii）引發(fā)感染最重要的β-內(nèi)酰胺類（β-lactam）抗生素之一。而碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌在我國各地的廣泛流行，給臨床治療與抗生素的選擇帶來極大的困難。為了制定科學、有效的防控措施，通常采用各種分子分型方法，對其進行分子流行病學研究并明確流行趨勢，為進一步探究鮑曼不動桿菌的耐藥機制提供基礎。
　　 本研究于2009年1

2、月至2010年12月期間在全國23個省市的64家醫(yī)院收集2197株非重復的鮑曼不動桿菌，并選擇12種常見抗菌藥物開展體外藥物敏感性試驗。根據(jù)藥敏結(jié)果，對篩選出的808株碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌應用多位點序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)方法進行分子流行病學研究;借助Linux服務器、DNA序列拼接與比對工具編寫Perl腳本，實現(xiàn)對各等位基因測序數(shù)據(jù)的批量處理，并鑒定出等位基因型(Allele ty

3、pe)與序列型(Sequence type，ST);應用eBURST軟件與Bionumerics軟件對MLST數(shù)據(jù)進行聚類分析，預測各菌株間的進化關系。
　　 體外藥物敏感性試驗結(jié)果顯示，所有鮑曼不動桿菌對12種臨床常用抗生素的平均耐藥率為50％～60％，而米諾環(huán)素僅有11.56％。MLST結(jié)果顯示，碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌的遺傳背景相對單一，共分為40個ST型（包括17個已被PubMLST數(shù)據(jù)庫收錄及23個新發(fā)現(xiàn)的ST型），其

4、中ST92及其單位點變異型（Single locus variant，SLV）ST138、ST75與ST381為最主要流行的ST型。應用eBURST軟件與Bionumerics軟件分析MLST數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)當前中國最廣泛流行的鮑曼不動桿菌克隆復合體(Clonal complex，CC)為CC92，該克隆復合體包括ST92、ST138、ST75等ST型。本研究中的體外藥物敏感性試驗結(jié)果也表明，屬于CC92的菌株較其他ST型菌株具有更高的耐藥率

5、。
　　 上述研究結(jié)果表明，CC92是鮑曼不動桿菌流行最廣的克隆復合體，它在我國分布廣泛且傳播迅速，常伴隨多重耐藥鮑曼不動桿菌的播散與流行。因此，CC92在我國的大范圍流行是導致鮑曼不動桿菌對多種抗菌藥物耐藥率迅速上升的重要原因。
　　 具有碳青霉烯類抗生素水解能力的D類β-內(nèi)酰胺酶（Carbapenem-hydrolyzingclass Dβ-lactamases，CHDLs）是不動桿菌（Acinetobacter s

6、pp.）最常見的碳青霉烯酶，帶介導其對碳青霉烯類抗生素耐藥。本研究主要應用分子生物學手段，探討5種常見編碼CHDLs的OXA耐藥基因在不動桿菌中的分布與耐藥表型、傳播機制之間的關系。
　　 本研究對收集于2009年1月至2010年12月期間全國23個省市64家醫(yī)院分離的2880株不動桿菌開展體外藥物敏感性試驗，測定其對12種抗菌藥物的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）;并應用

7、PCR擴增與測序技術(shù)，對篩選出攜帶blaoxA-51-like、blaoxA-23-like、blaoxA-24-like、blaoxA-58-like與blaoxA-143-like基因的不動桿菌進行菌種鑒定;應用脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field gelelectrophoresis，PFGE)與Southern雜交確定OXA基因的定位;應用質(zhì)粒抽提與電轉(zhuǎn)化確定攜帶OXA基因質(zhì)粒的可傳播性。
　　 體外藥物敏感性試驗結(jié)

8、果顯示，不動桿菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥率約為50％。多重PCR結(jié)果顯示，攜帶blaoxA-51-like基因與blaoxA-23-like基因的不動桿菌分別占76.3％與45.7％。而44.9％的不動桿菌同時攜帶blaoxA-51-like基因與blaoxA-23-like基因，高達95％攜帶blaoxA-23-like基因的不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥。此外，篩查發(fā)現(xiàn)攜帶blaoxA-24-like基因、blaoxA-58-lik