不動桿菌屬OXA-23及OXA-24-40型碳青霉烯酶傳播機制研究.pdf

1、不動桿菌屬是院內感染重要致病菌之一，以鮑曼-醋酸鈣不動感桿菌復合體為主，可引起肺炎、皮膚軟組織感染、傷口感染、尿路感染、腦膜炎以及血流感染等。近年來，不動桿菌屬碳青霉烯耐藥率不斷上升，給臨床用藥與治療形成了極大的挑戰(zhàn)，而不動桿菌屬碳青霉烯耐藥的主要機制之一為產OXA型碳青霉烯酶。本研究對國內不動桿菌屬OXA-23與OXA-24/40型碳青霉烯酶的傳播機制進行了深入分析。
　　OXA-23酶是不動桿菌屬中最常見的OXA類碳青霉烯酶。

2、本課題組于2009年1月至2010年12月在全國18個省、28家醫(yī)院收集了產OXA-23型碳青霉烯酶的60株鮑曼不動桿菌與3株院內不動桿菌，這些菌株來自不同省市地區(qū)以代表不同的遺傳背景。研究通過PCR擴增blaOXA-23基因周圍結構，S1/ApaI-PFGE-Southern blot明確blaOXA-23基因定位，并通過微量肉湯稀釋法明確菌株美羅培南、亞胺培南的MIC值，探討其耐藥性與基因定位、拷貝數(shù)的關系。此外，借助電轉化、接合轉

3、移等方式檢測質粒的轉移能力，并對代表性質粒進行了高通量測序與序列分析。
　　研究結果顯示，攜帶染色體編碼blaOXA-23基因的共有35株鮑曼不動桿菌;而25株鮑曼不動桿菌與3株院內不動桿菌則攜帶blaOXA-23基因陽性質粒，其中3株鮑曼不動桿菌亦攜帶一個位于定位于染色體上的blaOXA-23基因拷貝。blaOXA-23基因的定位、拷貝數(shù)對細菌碳青霉烯耐藥性的影響不明顯。研究中僅發(fā)現(xiàn)兩種攜帶blaOXA-23基因的質粒，大小分別

4、約為78kb與50kb。78kb的質粒以pAZJ221為代表，可通過電轉化及接合的方式進行轉移，為23株鮑曼不動桿菌及3株院內不動桿菌中所攜帶。兩株鮑曼不動桿菌攜帶50kb質粒，該質粒僅能通過電轉化進行轉移。Tn2009是國內最常見的攜帶blaOXA-23基因的轉座子(n=57)，其次為Tn2008(n=5)和Tn2006(n=1）。完成了質粒pAZJ221的全序列，其功能結構主要為兩部分:Tn2009以及接合元件。
　　上述研究

5、結果表明，blaOXA-23基因定位于染色體上的比例較定位于質粒的比例稍高，需警惕OXA-23型碳青霉烯酶的克隆傳播。Tn2009是我國不動桿菌屬細菌中最常見的攜帶blaOXA-23基因的轉座子，其與可接合性質粒pAJ221促進了OXA-23型碳青霉烯酶在中國的傳播。因此水平傳播在blaOXA-23基因的傳播中起著重要作用。
　　其次，本研究以前期在全國2880株不動桿菌屬細菌中篩查到的11株產OXA24/40-like碳青霉烯酶

6、的不動桿菌屬細菌作為研究對象，對不動桿菌屬OXA-24/40-like碳青霉烯酶傳播機制進行了探討。除1株鮑曼不動桿菌外，其余10株細菌攜帶的blaOXA24/40-like基因定位于質粒上。通過PFGE分型，11株細菌被歸為10種不同克隆型，僅2株鮑曼不動桿菌屬同一克隆型。借助質粒抽提與PCR walking、質粒高通量測序與序列分析等手段，發(fā)現(xiàn)9株細菌中blaOXA24/40-like基因均位于XerC/XerD同源重組系統(tǒng)中。通過

7、比對質粒復制子序列發(fā)現(xiàn)，2株鮑曼不動桿菌與1株pitti不動桿菌攜帶的blaOXA-72陽性質粒屬于同一類型，而其他6株細菌攜帶的質粒類型各不相同。部分質粒結構中存在質粒移動蛋白與VapBC毒素-抗毒素系統(tǒng)。經過對質粒pA2503進行序列比對發(fā)現(xiàn)，該質粒與分離于同一時期、同一家法國醫(yī)院的兩個質粒pMCCU3、 pMMD序列較為相似。
　　目前國內不動桿菌屬攜帶的blaOXA24/40-like基因以blaOXA-72基因為主，尚未