多重耐藥鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶基因檢測和多位點序列分型.pdf

1、目的：
　　鮑曼不動桿菌是一種革蘭陰性桿菌非發(fā)酵菌，屬于條件致病菌。其廣泛分布于醫(yī)院環(huán)境、水、土壤以及人體皮膚表面，為醫(yī)院感染的重要條件致病菌之一，極易引起敗血癥、心內膜炎、繼發(fā)性腦膜炎、獲得性肺炎、創(chuàng)口感染和尿路感染等在內的多種院內感染。隨著臨床廣譜坑生素和免疫抑制劑的應用，大量出現了對碳青霉烯類、頭孢菌素類、β-內酰胺類、氨基糖苷類和氟喹諾酮類3種及以上抗生素同時耐藥的鮑曼不動桿菌，多重耐藥鮑曼不動桿菌在臨床上的分離率越來越高

2、，在醫(yī)院內廣泛流行，給臨床工作者預防感染及治療帶來巨大的挑戰(zhàn)。檢測多重耐藥鮑曼不動桿菌對臨床常見抗菌藥物的敏感性并測定其耐藥基因，分析菌株間親緣進化關系，對菌株進行同源性的研究顯得尤為重要。其能夠為臨床醫(yī)生合理使用抗生素，為預防和控制多重耐藥鮑曼不動桿菌引起的院內感染和暴發(fā)流行提供一定的理論依據，給多重耐藥鮑曼不動桿菌的分子流行病學調查和研究奠定實驗室基礎。
　　方法：
　　收集本實驗室2015年從安徽地區(qū)34家醫(yī)院臨床分離

3、而來的多重耐藥鮑曼不動桿菌87株。首先采用瓊脂二倍稀釋法測定其對臨床11種常用抗生素的敏感性，用 PCR方法檢測多重耐藥鮑曼不動桿菌攜帶的碳青霉稀類主要的相關耐藥基因，OXA-23、OXA-51、OXA-24、OXA-58型等；然后應用多位點序列分型（MLST）方法分析87株臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌同源性，獲得每個菌株的等位基因譜（allelic profile）和其所對應的序列型(sequence type,ST)。在菌株等位基

4、因譜和 ST型已知的基礎上使用 Bionumerics軟件構建最小生成樹圖和聚類圖，eBURST軟件分析確定其所屬于的克隆復合體（clone complex）。
　　結果：
　　87株多重耐藥鮑曼不動桿菌美羅培南、亞胺培南的耐藥率分別為66.7%，74.7%。68株菌對慶大霉素耐藥，62株對哌拉西林/他唑巴坦耐藥，47株對左氧氟沙星耐藥，60株對頭孢曲松耐藥，對其他抗菌藥物均顯示出較高的耐藥率。PCR實驗中87株多重耐藥鮑曼

5、不動桿菌oxa-51基因攜帶率為100%，攜帶oxa-23基因的鮑曼不動桿菌有82株，占94.3%，沒有發(fā)現攜帶oxa-58、oxa-24基因的多重耐藥鮑曼不動桿菌。MLST實驗中87株鮑曼不動桿菌分為42個ST型，其中6個型別是數據庫里原來有的，36個型別為新的型別（暫時命名為STnew01-STnew36）。本地區(qū)2015年87株多重耐藥鮑曼不動桿菌主要的流行克隆株等位基因譜為 ST2（2-2-2-2-2-2-2），包含37株菌，占

6、42.5%，是優(yōu)勢型別，與世界上很多國家的多重耐藥鮑曼不動桿菌主要流行克隆株 ST型具有高度的同源性；其余41個型別分別包含1-4株菌。其中35個型別只包含1株菌，即有35株菌具有獨特的ST型。應用eBURST軟件分析巴斯德研究所網站上所有鮑曼不動桿菌等位基因譜，確定本實驗中 ST2型鮑曼不動桿菌屬于克隆復合體 CC1。ST型為 STnew05、STnew01、STnew29、STnew06、STnew04、STnew28、STnew2

7、1、ST724、ST570與ST2型鮑曼不動桿菌只具有一個等位基因上的差別，因此也都屬于克隆群CC1。而本實驗中出現的一株ST105型的鮑曼不動桿菌屬于CC4，ST63屬于CC6，ST235則屬于獨立的ST型。36株新的 ST型菌株等位基因譜分別是 STnew01(2-2-2-2-2-2-49)、STnew02(13-4-40-1-42-1-1)、STnew03(1-3-2-1-3-1-46)、STnew04(2-2-2-2-2-2-4

8、4)、STnew05(2-2-2-2-2-2-20)、STnew06(2-2-2-2-2-2-2-97)、STnew07(13-4-40-1-42-1-98)、STnew08(13-4-40-1-42-1-2)、STnew09(3-2-5-1-3-1-2)、STnew10(2-2-2-2-3-1-2)、STnew11(13-4-2-3-6-1-2)、STnew12(8-5-5-1-7-1-2)、STnew13（3-4-4-2-9-1-2

9、）、STnew14(3-1-2-1-18-1-2)、STnew15(3-1-7-1-7-2-2)、STnew16(17-20-23-10-20-13-2)、STnew17(20-26-26-14-26-16-2)、STnew18(23-20-28-10-25-18-2)、STnew19(45-20-44-67-25-29-2)、STnew20(27-2-110-57-121-56-2)、STnew21(2-2-2-2-2-2-3)、ST

10、new22(1-3-40-2-7-1-4)、STnew23(3-1-2-2-3-2-4)、STnew24(3-5-5-1-7-1-26)、STnew25(1-4-2-2-7-1-29)、STnew26(22-26-90-14-23-16-48)、STnew27(3-3-3-4-7-4-49)、STnew28(2-2-2-2-2-2-51)、STnew29(2-2-2-2-2-2-63)、STnew30(97-2-13-2-3-2-2)、

11、STnew31(97-2-13-2-3-2-2)、STnew32(3-2-2-2-2-2-5)、STnew33(1-4-2-2-7-1-2)、STnew34(22-26-90-14-23-16-2)、STnew35(3-2-2-2-3-4-2)、STnew36(3-3-2-5-7-2-44)。
　　結論：
　　多重耐藥鮑曼不動桿菌對11種常見臨床抗菌藥物均呈現出較高的耐藥率，87株多重耐藥鮑曼不動桿菌均攜帶OXA-51基因，