紅花黃色素注射液對糖尿病腎病大鼠的保護作用以及對血管緊張素Ⅱ1型受體影響的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過首先建立糖尿病(DM)動物模型，進而發(fā)展為糖尿病腎病(DN)，應(yīng)用紅花黃色素注射液對模型進行干預(yù)性治療，通過觀察實驗動物的24小時尿蛋白定量、糖化血紅蛋白、血脂、腎功能、腎臟病理形態(tài)學(xué)變化以及腎組織中血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)的表達，研究紅花黃色素對糖尿病腎病的治療作用及其可能機制，為其臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：選用清潔級健康雄性SD大鼠46只，體重200±10g，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，代謝

2、籠取尿檢測尿糖和尿蛋白均為陰性，按體重隨機分為正常組10只，模型組、貝那普利組、紅花黃色素組各12只。除正常組外，其余各組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/g，正常組注射相應(yīng)量生理鹽水，72小時后測血糖，以≥16.7mmol/L為DM模型成模標(biāo)準(zhǔn)。造模各組在DM模型成模后，按血糖水平重新分組，組別與動物數(shù)不變。治療各組按成人劑量的20倍給藥，每日一次。紅花黃色素組給與紅花黃色素注射液26.7mg/kg腹腔注射，貝那普利組給

3、與貝那普利10mg/kg灌胃，正常組和模型組均腹腔注射相應(yīng)量的生理鹽水，各組共給藥23周。于DM成模后第24周末禁食不禁水留取各組大鼠24小時尿液測定24小時尿蛋白定量；而后麻醉動物，取血檢測各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)；摘取腎臟稱重計算肥大指數(shù)，光鏡、電鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法檢測腎組織AT1R表達情況，并用計算機病理圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析

4、。 結(jié)果： 1.實驗大鼠的一般狀況正常組大鼠飲食正常，眼睛有神，反應(yīng)敏捷，肌肉豐滿，糞便呈麥粒狀，尿量正常。其余3組注射STZ后，均出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，并慢慢出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，少動抱團。實驗最后一周，與正常組相比，造模各組大鼠明顯體型瘦小，肌肉偏少，上述癥狀以模型組最為顯著。治療期間造模各組均有大鼠死亡情況，其中模型組死亡3只，貝那普利組死亡1只，紅花黃色素組死亡2只，死亡原因估計為高血糖引起代謝紊亂最

5、終導(dǎo)致臟器衰竭。 2.各組大鼠體重、右腎重、肥大指數(shù)(腎重/體重)的比較模型組、貝那普利組、紅花黃色素組大鼠體重比正常組明顯偏輕，而三個造模組各組之間大鼠體重?zé)o顯著性差異；正常組與造模各組大鼠右腎重?zé)o顯著性差異；模型組、貝那普利組、紅花黃色素組大鼠肥大指數(shù)與正常組相比明顯偏高，而模型組與兩個治療組之間無顯著性差異。 3.各組大鼠24小時尿蛋白定量的比較24小時尿蛋白定量，模型組、貝那普利組、紅花黃色素組與正常組比較均有顯

6、著升高，貝那普利組、紅花黃色素組與模型組比較則明顯偏低，而貝那普利組與紅花黃色素組之間無顯著區(qū)別。 4.各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)的比較模型組、貝那普利組、紅花黃色素組各組大鼠糖化血紅蛋白比正常組明顯升高，而模型組、貝那普利組、紅花黃色素組之間無顯著性差異。 5.各組大鼠血脂的比較造模各組血清總膽固醇(TC)明顯高于正常組，紅花黃色素組則比模型組明顯偏低，而貝那普利組與模型組比較無明顯差異；對于甘油三酯(TG)，

7、兩個治療組與正常組均低于模型組，而兩個治療組與正常組比較無顯著性差異。 6.各組大鼠腎功能的比較兩個治療組與正常組的血肌酐(Scr)明顯低于模型組，貝那普利組則高于正常組，而紅花黃色素組與正常組之間無顯著性差異；對于尿素氮(BUN)，兩治療組與正常組也均明顯低于模型組，而與正常組比較，貝那普利組和紅花黃色素組的BUN則明顯升高，而兩者之間的升高水平無顯著性差異。 7.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察 7.1光鏡觀察正常組腎小球

8、結(jié)構(gòu)完整，未見腎小球肥大，腎小球毛細血管基底膜、系膜、基質(zhì)未見明顯異常改變；模型組可見腎小球肥大，腎小球毛細血管基底膜增厚，腎小球系膜細胞增生、系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)增寬；貝那普利組與紅花黃色組也均有不同程度病理改變，但與模型組相比病變較輕。 7.2電鏡觀察正常組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)清晰完整，毛細血管內(nèi)皮細胞、足細胞未見異常；模型組腎小球基底膜顯著增厚，大部分呈勻質(zhì)樣增厚，部分增厚呈丘狀隆起，毛細血管內(nèi)皮細胞重度融合，窗口大部分消失，

9、足突廣泛融合；貝那普利組和紅花黃色素組也有類似病理變化，但程度明顯較輕。 8.免疫組化觀測結(jié)果AT1R在大鼠腎組織的表達主要位于腎小管內(nèi)，以近端小管為主，遠端小管也有表達，但表達較弱，腎血管周圍也有表達，而在腎小球內(nèi)基本無表達。在正常組、模型組和兩個治療組中均有表達。半定量分析結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組的表達要明顯加強，而兩個治療組的表達也明顯強于正常組；與模型組比較，貝那普利組和紅花黃色素組的表達要顯著降低，貝那普利組和紅