血管緊張素-（1-7）對糖尿病大鼠腎臟影響的研究.pdf

1、目的：通過觀察Ang-(1-7)對鏈脲佐菌素所致糖尿病大鼠的腎功能及各種細(xì)胞增殖指標(biāo)的影響，探討其對糖尿病大鼠腎臟的影響。 方法：65只雄性SD大鼠，單腎切除術(shù)后4周(術(shù)后存活60只)，其中47只予空腹一次性腹腔注射STZ造成糖尿病模型，剩余13只注射枸櫞酸緩沖液作為單腎切除對照組(C組n=13)。注射STZ后3天測定大鼠空腹血糖，大于13.8mmol/l者DM模型成功。成模DM大鼠(共32只)隨機(jī)分為兩組，糖尿病模型干預(yù)組予每

2、日腹腔注射Ang-(1-7)(10-6mol/l，80pmol/100g)，糖尿病模型對照組僅注射等量生理鹽水以作對照。至實驗結(jié)束共有糖尿病干預(yù)組大鼠13例(T組n=13)，糖尿病模型對照組大鼠11例(D組n=11)。實驗期間嚴(yán)密觀察大鼠一般狀況，成模10周后實驗結(jié)束，取血測定血糖、血尿素氮、血肌酐，留24小時尿液測定尿尿素氮、肌酐以及24小時尿總蛋白。剖腹取出腎臟漂洗稱重后，部分腎臟組織4％甲醛固定、常規(guī)石蠟切片、HE染色、光鏡下作形

3、態(tài)學(xué)觀察。余下腎臟組織保存于液氮中，Trizol法提取其總RNA，RT-PCR法檢測腎臟組織內(nèi)PDGF、TGF-β、CⅣ的基因表達(dá)水平。應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計，所有計量資料用(x±s)表示，采用t檢驗。 結(jié)果與討論：1.大鼠一般狀況：實驗結(jié)束時，C組大鼠一般生長狀況良好，體重介于360～500g，毛色光亮，活動正常，精神狀態(tài)良好，實驗過程中無死亡。D組和T組大鼠在實驗結(jié)束時體重均明顯降低，T組大鼠狀況總體上優(yōu)于D組

4、。D組大鼠精神萎靡，活動度差，毛發(fā)混亂，毛色枯黃，至實驗結(jié)束時共死亡5只。T組大鼠毛發(fā)較紊亂并缺少光澤，精神稍差，活動度降低，死亡3只。從大鼠一般狀況觀察，說明大鼠糖尿病模型復(fù)制成功，Ang-(1-7)對糖尿病大鼠的一般生長狀況有所改善。2.基礎(chǔ)指標(biāo)：(1)D組和T組大鼠血糖和尿量明顯高于C組(P＜0.01)，體重明顯低于C組(P＜0.01)，說明并證實了DM模型的確立。(2)D、T組之間，血糖、體重、尿量無明顯區(qū)別(P＞0.05)，說

5、明Ang-(1-7)對糖尿病大鼠的血糖以及高血糖引起的體重減少和尿量增加等癥狀無明顯影響。(3)D組和T組大鼠的腎重體重比顯著高于C組(P＜0.01)，證實了DN模型的成功。而D、T組之間腎重體重比也有明顯差異(P＜0.05)，說明Ang-(1-7)對腎臟增生病變有抑制作用。3.血液尿液生化指標(biāo)：(1)血尿肌酐與尿素氮水平以及肌酐清除率在3個實驗組均未見明顯改變(P＞0.05)，可能由于病程不夠長，DM大鼠腎臟尚處于早期腎病，故尚未出現(xiàn)

6、明顯的腎功能改變。(2)尿總蛋白定量結(jié)果顯示D組和T組顯著高于C組大鼠(P＜0.05)，說明了DN模型的成功，而在D、T組之間，兩者也有顯著性差異(P＜0.05)，進(jìn)一步證實了Ang-(1-7)對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用。4.形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果：(1)C組大鼠：腎臟橫截面腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞間基質(zhì)少，腎小球上皮細(xì)胞無明顯腫脹，毛細(xì)血管形態(tài)正常。(2)D組：腎小球體積明顯增大，系膜細(xì)胞增多肥大，系膜區(qū)增寬，毛細(xì)血管受壓明顯，管腔塌陷。(3

7、)T組：腎小球體積增大，系膜細(xì)胞增多不明顯，腎小球毛細(xì)血管受壓，部分管腔狹窄。5.RT-PCR結(jié)果顯示：(1)T組和D組大鼠的TGF-β、PDGF、CⅣ在腎臟內(nèi)的mRNA表達(dá)水平均較C組顯著增強(qiáng)(P＜0.01)，說明并證實了DN模型的確立。(2)T組大鼠TGF-β、PDGF、CⅣ在腎臟內(nèi)的mRNA表達(dá)水平較D組則明顯下降(P＜0.01)。結(jié)論1.本實驗DM及DN模型復(fù)制成功。2.Ang-(1-7)干預(yù)的T組糖尿病大鼠一般狀況較D組模型對