八肽膽囊收縮素對(duì)體外培養(yǎng)大鼠大腦皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：在新生大鼠大腦皮層神經(jīng)元培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，建立谷氨酸誘導(dǎo)的體外大腦皮層神經(jīng)元損傷模型，研究八肽膽囊收縮素（CCK-8）對(duì)大腦皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用，探討其保護(hù)作用是否與調(diào)節(jié)Bcl-2、Bax和Caspase-3三種蛋白的表達(dá)有關(guān)。 方法：在無(wú)菌條件下，將新生24h內(nèi)的SpragueDawley大鼠斷頭取腦，剔除腦膜及血管，分離皮層組織，原代培養(yǎng)8d，進(jìn)行神經(jīng)元鑒定后隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、Glu組、CCK組。對(duì)照組不予任何處理；G

2、lu組用50μmol/L谷氨酸處理30min后，換用正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；CCK組在谷氨酸處理前先用CCK-8（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）處理24h；各組細(xì)胞在谷氨酸損傷后用原培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后獲取標(biāo)本待檢。用噻唑藍(lán)（MTT）染色法檢測(cè)神經(jīng)元活力；用吖啶橙/溴乙啶及DAPI染色，在熒光顯微鏡下觀察神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspase-3三種蛋白的表達(dá)。

3、結(jié)果： （1）在倒置相差顯微鏡下觀察，原代培養(yǎng)8d的大鼠大腦皮層神經(jīng)元胞體飽滿，立體感強(qiáng)，突起較長(zhǎng)，互相連接，形成致密的網(wǎng)絡(luò)。 （2）經(jīng)谷氨酸損傷后神經(jīng)元活力較對(duì)照組明顯降低（P<0.05）；3個(gè)不同濃度的CCK組神經(jīng)元活力均較Glu組高（P<0.05），且CCK-8濃度越高，神經(jīng)元活力越高。 （3）吖啶橙/溴乙啶及DAPI染色可見(jiàn)Glu組有凋亡細(xì)胞的特征性形態(tài)學(xué)變化，表現(xiàn)為胞膜皺縮，突起回縮或斷裂，胞核固縮，并

4、可見(jiàn)到凋亡小體；CCK組細(xì)胞的形態(tài)與未損傷細(xì)胞相似，與Glu組相比，凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞損傷減輕。 （4）與對(duì)照組相比，Glu組Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與Glu組相比，CCK組則上調(diào)Bcl-2蛋白、下調(diào)Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論： （1）在培養(yǎng)新生大鼠大腦皮層神經(jīng)元的基礎(chǔ)上，成