漢坦病毒感染體外培養(yǎng)的乳鼠大腦皮層神經(jīng)元誘導(dǎo)凋亡發(fā)生的初步研究.pdf

1、漢坦病毒（HTV）屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬,是引起腎綜合征出血熱(HFRS)和漢坦病毒肺綜合征(HPS)的致病病毒。HTV是一種泛嗜性病毒，病毒抗原在體內(nèi)多種器官和多種類(lèi)型細(xì)胞中分布。腦組織也是HFRS病毒感染的重要靶器官之一。我們以往的研究證實(shí)HTV感染乳鼠腦神經(jīng)細(xì)胞中NP抗原免疫組化染色陽(yáng)性，定位于胞漿內(nèi)，分布于皮層、海馬回、小腦蒲肯野細(xì)胞層等部位。
　　本實(shí)驗(yàn)在建立乳小鼠、乳大鼠大腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上，在體外對(duì)

2、HTV在腦皮層神經(jīng)元中的感染以及病毒感染對(duì)神經(jīng)元的致病性進(jìn)行初步研究。實(shí)驗(yàn)中采用出生后24hr之內(nèi)的乳大鼠、乳小鼠，做神經(jīng)元的原代培養(yǎng)，分別感染HTNV76-118株和SEOVL99株病毒，分別于感染后1、2、3、4、5、6、7d收集細(xì)胞，進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色、RT-PCR、Real-timePCR、Westernblot檢測(cè)，觀察到HTV對(duì)神經(jīng)元易感，在神經(jīng)元內(nèi)成功復(fù)制、增殖。同時(shí)為了證實(shí)我們觀察到的感染后神經(jīng)元出現(xiàn)的CPE是否為凋亡

3、我們又進(jìn)行了一系列凋亡檢測(cè)，Hoechst染色、TUNEL和細(xì)胞凋亡ELISA檢測(cè)證實(shí)病毒感染確實(shí)誘導(dǎo)了凋亡發(fā)生，而后的凋亡相關(guān)基因檢測(cè)和Mitotracker○RRedCMXRos染色顯示，隨著病毒感染時(shí)間的延長(zhǎng)抗凋亡蛋白Bcl-2逐漸減少，而促凋亡基因Bax、p53、CytC、caspase逐漸增加，達(dá)到高峰才下降，提示HTV感染可能誘導(dǎo)了p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑。本實(shí)驗(yàn)在乳大、小鼠大腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)的體系基礎(chǔ)上，證實(shí)了神經(jīng)元