神經(jīng)酰胺通過Akt1-Foxo3a信號通路誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 1.研究神經(jīng)酰胺(C2-ceramide,Cer)作用下，Beclin1,LC3,Akt1,Foxo3a在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)
　　 2.探討Cer/Akt1/Foxo3a信號通路在卵巢癌發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用MTT法檢測在不同濃度C2-神經(jīng)酰胺作用下，卵巢癌細(xì)胞的抑制率。
　　 2.應(yīng)用FCM法檢測不同濃度的C2-神經(jīng)酰胺作用下，卵巢癌細(xì)胞的凋亡率。

2、
　　 3.應(yīng)用透射電鏡觀察在25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用下，卵巢癌細(xì)胞的自噬溶酶體。
　　 4.應(yīng)用實時定量PCR法檢測在25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用下Beclin1,LC3在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 5.應(yīng)用Western blot法檢測25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用下，Beclin1,LC3,Akt1,Foxo3a在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.

3、隨著C2-神經(jīng)酰胺濃度的增加，對卵巢癌細(xì)胞增殖的抑制越來越大，IC50為55.719mmol/L。
　　 2.卵巢癌細(xì)胞的凋亡對C2-神經(jīng)酰胺具有濃度依賴，但小于25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺幾乎不引起卵巢癌的凋亡。
　　 3.透射電鏡觀察25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用后卵巢癌細(xì)胞的自噬溶酶體數(shù)量顯著增多。
　　 4.25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用后Beclin1,LC3在卵巢癌細(xì)胞中mRN

4、A和蛋白水平表達(dá)都是增加，LC3蛋白有兩個亞基LC3Ⅰ和LC3Ⅱ，LC3Ⅰ,LC3Ⅱ表達(dá)都是增加，并且LC3Ⅱ高于LC3Ⅰ。
　　 5.25mmol/L C2-神經(jīng)酰胺作用下，p-Akt1（Ser473）蛋白表達(dá)減少；Foxo3a蛋白表達(dá)增加。
　　 結(jié)論：
　　 1.C2-神經(jīng)酰胺可以通過Akt1/Foxo3a信號通路誘導(dǎo)巢癌細(xì)胞自噬性死亡。
　　 2.C2-神經(jīng)酰胺可活化自噬相關(guān)基因Beclin