C6神經(jīng)酰胺誘導結腸癌細胞自噬和信號機制研究.pdf

1、背景:
　　結腸癌是癌癥相關死亡的第二大原因。耐藥性及對正常細胞的毒性限制了目前的化療方案治療結腸癌效果。尋找化療替代藥物是目前臨床及基礎研究的熱點。
　　目的:
　　在體外培養(yǎng)的結腸癌HT-29中，我們研究了具有細胞通透性的短鏈神經(jīng)酰胺C6（C6ceramide）細胞毒性作用，重點明確其細胞毒作用的機制。
　　方法:
　　MTT（3-（4，5-二甲基吡啶-2-基）-2，5-二苯基溴化）法，集落形成試驗和臺

2、盼藍被用來測試的HT-29細胞存活。AnnexinV染色，組蛋白-DNAELISA法和Caspase-3活性法用來評估HT-29細胞凋亡。包括Ulk1、LC3B及Beclin-1自噬相關蛋白用Westernblot檢測。Westernblots測定磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(5'-AMPactivatedproteinkinase，AMPK)激活。AMPK的活性調控則由shRNA敲除或基因突變（組成性激活，CA）來完成。
　　結果:<

3、br>　　我們觀察到C6神經(jīng)酰胺劑量和時間依賴性誘導的HT-29細胞死亡。然而，在C6神經(jīng)酰胺處理的HT-29細胞中，并沒有觀察到顯著的細胞凋亡。結果顯示，在HT-29細胞中，C6神經(jīng)酰胺自噬性細胞死亡。自噬抑制劑3-methyaldenine(3-MA)和羥氯喹抑制C6神經(jīng)酰胺的細胞毒作用，而自噬激活劑依維莫司(RAD001)和temsirolimus模擬C6神經(jīng)酰胺的作用，并誘導HT-29細胞死亡。此外，運用分子生物學方法，我們證實