銀杏苦內(nèi)酯B對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織PAF-R的影響及機(jī)制.pdf

1、重癥急性胰腺炎(SAP)屬病理分型的急性出血壞死型胰腺炎(AHNP)，本病起病急，病情兇險(xiǎn)，死亡率高。這種疾病以血流動(dòng)力學(xué)改變和全身炎癥反應(yīng)為特征，并導(dǎo)致多器官功能障礙。SAP的發(fā)病機(jī)制至今存在多種學(xué)說(shuō)，臨床尚無(wú)有效的治療措施。胰腺微循環(huán)障礙是急性胰腺炎(AP)的啟動(dòng)、持續(xù)和加劇損害的因素。在本病程過(guò)程中，細(xì)胞因子的釋放造成了全身性的反應(yīng)，如：全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)、多器官功能障礙綜合征(MODS)、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS

2、)、敗血病等。此外，細(xì)胞因子在作為S．AP主要致死原因的多器官衰竭中起著軸心作用。 眾多的細(xì)胞因子中，PAF是一種與胰腺微循環(huán)障礙密切相關(guān)的血管活性物質(zhì)。PAF在體內(nèi)主要通過(guò)特異性的PAF受體(PAF-R)將信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞的生命活動(dòng)。PAF．R屬于7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體家族，活化后偶聯(lián)于特異性的異三聚體G蛋白，開(kāi)啟胞內(nèi)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，代號(hào)為BN52021)是血小板

3、活化因子受體(PAF-R)的特異性拮抗劑。為“國(guó)寶”銀杏葉提取物中的萜類化合物，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究顯示該化合物治療AP效果顯著，但是具體的作用機(jī)制尤其是分子機(jī)制缺乏深入研究。 目的:本實(shí)驗(yàn)以Wistar大鼠SAP模型為研究對(duì)象，以PAF-R的拮抗劑BN52021進(jìn)行治療干預(yù)，大體觀察Wistar大鼠SAP模型的制作效果，用比色法技術(shù)檢測(cè)血漿淀粉酶的變化，并對(duì)胰腺組織進(jìn)行病理觀察和評(píng)分；通過(guò)，western blot等技術(shù)檢測(cè)大

4、鼠胰腺組織PAF-R的動(dòng)態(tài)變化。根據(jù)血漿淀粉酶活性、病理學(xué)評(píng)分和PAF-R表達(dá)量變化，評(píng)價(jià)BN52021對(duì)SAP的治療作用和它對(duì)大鼠胰腺組織PAF-R的影響，同時(shí)結(jié)合前期研究及相關(guān)研究結(jié)果，探討PAF-R在SAP時(shí)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的作用以及BN52021對(duì)此過(guò)程的治療機(jī)制。 方法 雄性Wistar大鼠180只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC，n=60)，SAP組(SAP，n=60)及BN‘52021治療組(BN,n=60)，每組按

5、術(shù)后6個(gè)不同時(shí)相點(diǎn)(1h,2h,3h,6h，12h,24h)再分為6小組，各組10只。麻醉狀態(tài)下，微量注射器逆行膽胰管注射5％牛磺膽酸鈉(1mL·kg<'-1>)，BN組術(shù)后15分鐘股靜脈注射BN 52021(5mg·kg<'-1>)，NC組、SAP組股靜脈注射等量生理鹽水。各組分別在處理后1h,2h,3h,6h，12h,24h麻醉并開(kāi)胸和開(kāi)腹，迅速采集心臟血液和胰腺組織。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血漿淀粉酶。取胰腺組織HE染色制片，觀察

6、胰腺組織的病理學(xué)變化，對(duì)其進(jìn)行病理組織評(píng)分。提取胰腺組織蛋白，進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，Western blot測(cè)定胰腺組織PAF-R．蛋白含量，用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。 結(jié)果 (1)血漿淀粉酶結(jié)果顯示，SAP組和BN組在各時(shí)相點(diǎn)與NC組相比顯著升高(P<0.05)，BN組在1h、2h、3h、6h和24h較SAP組顯著降低(P<0.05)。隨著時(shí)間的推移，SAP組胰腺及周圍組織器官水腫、出血和壞死面積逐漸擴(kuò)大

7、，程度逐漸加重，胸腹腔積液也增多。病理組織評(píng)分結(jié)果示，SAP組與BN組各時(shí)間點(diǎn)同NC組比較具有顯著差異(P<0.05)。BN組在3h、6h、12h時(shí)點(diǎn)與SAP組具有顯著差異(P<0.05)。 (2)胰腺組織中PAF.R的Westem blot結(jié)果顯示，NC組在各時(shí)間點(diǎn)變化不明顯，各時(shí)間點(diǎn)沒(méi)有顯著差異(P>0.05)；SAP組和BN組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的比較，1h、2h、3h、6h時(shí)間點(diǎn)具有顯著差異(P<0.05)，12h、24h時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差

8、異(P>0.05)。SAP組和：BN組是動(dòng)態(tài)變化的，早期逐漸上升，在3h達(dá)到高峰(P<0.05)，以后逐漸降低。除1h時(shí)間點(diǎn)外，各時(shí)間點(diǎn)SAP組與NC組組間有顯著性差異(P<0.05)，BN組較NC組有顯著性差異(P<0.05)，BN組與SAP組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: (1)逆行胰膽管內(nèi)注射5％牛磺膽酸鈉制備大鼠SAP模型是成功的，可靠的；BN52021對(duì)大鼠SAP有一定的治療作用。(2)PAF-R在SAP過(guò)程