葛根素對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織中NO生成及iNOS表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討重癥急性胰腺炎時(shí)胰腺組織一氧化氮(nitric-oxide，NO)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的表達(dá)變化以及葛根素對(duì)它們的影響。 方法：取54只健康雄性SD大鼠，體重250±30g，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(C組)，重癥急性胰腺炎組(A組)，葛根素處理組(P組)，每組18只。采用10％水合氯醛(0.003ml/g)腹腔注射麻醉，A組逆行胰膽管內(nèi)加壓注射5

2、％?；悄懰徕c(0.1ml/100g，0.1ml/min)建立SAP模型；C組注射等量生理鹽水；P組手術(shù)前2h給以葛根素25mg/kg腹腔注射，按照SAP模型制做方法注入5％?；悄懰徕c，術(shù)后再以25mg/kg腹腔注射給藥一次。C組及A組于術(shù)前2h和術(shù)后腹腔注射等量5％葡萄糖注射液(葛根素溶劑)。每組于6h、12h、24h時(shí)間點(diǎn)處死大鼠(n=6)，檢測分析血及腹水淀粉酶變化，并測定腹水量的變化，給以大體病理組織評(píng)分，’取胰腺組織HE染色觀察

3、胰腺組織病理學(xué)變化，同時(shí)檢測胰腺組織NO水平以及總一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase，iNOS)和結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(constitutive nitric oxide synthase，cNOS)的活性，并用RT-PCR及免疫組織化學(xué)的方法檢測iNOSmRNA及蛋白水平的變化。 結(jié)果：A組相對(duì)于C組，在6h腹水量、

4、血和腹水淀粉酶明顯升高(P<0.01)，病理組織學(xué)評(píng)分也顯示有顯著增高(P<0.01)，表示胰腺組織已有明顯的損傷。隨時(shí)間延長，腹水量及血、腹水淀粉酶進(jìn)一步增高，病理組織學(xué)評(píng)分也顯示胰腺組織損傷進(jìn)一步加重，12h到達(dá)高峰，24h仍維持在較高水平(P<0.01)，而在12h和24h兩時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。同時(shí)，在6h時(shí)間點(diǎn)上，胰腺組織中NO水平、總NOS、iNOS活性相對(duì)于C組也明顯升高(P<0.01)，免疫組化

5、和RT-PCR結(jié)果也顯示iNOS蛋白及iNOS mRNA表達(dá)增高(P<0.01)。隨時(shí)間延長，在12h和24h各指標(biāo)到達(dá)高峰，24h仍維持在較高水平(P<0.01)，在12h和24h兩時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。cNOS活性在各時(shí)間點(diǎn)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 P組在6h點(diǎn)上在病理組織學(xué)評(píng)分、血及腹水淀粉酶、NO及iNOS活性、iNOSmRNA的表達(dá)和iNOS蛋白表達(dá)方面與A組6h無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)

6、。但在12h和24 h，發(fā)現(xiàn)與A組相比，腹水量明顯下降，血和腹水淀粉酶明顯降低，大體組織病理評(píng)分和病理組織學(xué)評(píng)分也顯示胰腺組織損傷減輕，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01或P<0.05)。同時(shí)，胰腺組織NO水平、總NOS和iNOS水平也明顯降低(P<0.01或P<0.05)，免疫組化和RT-PCR結(jié)果也顯示iNOS蛋白和iNOSmRNA表達(dá)降低(P<0.01)。P組cNOS活性在各時(shí)間點(diǎn)與A組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。P組內(nèi)三時(shí)間

7、點(diǎn)各指標(biāo)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 A組和P組的NO水平與胰腺病理組織學(xué)評(píng)分之間在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上分別進(jìn)行了相關(guān)分析(相關(guān)系數(shù)分別為r<,1>=0.881，r<,2>=0.899，r<,3>=0.930，P<0.01)，表明它們成正相關(guān)。 結(jié)論：1.在重癥急性胰腺炎時(shí)，隨著時(shí)間的延長，iNOS表達(dá)增高，從而產(chǎn)生高濃度的NO，加重胰腺組織的損傷。2.葛根素在重癥急性胰腺炎6h后，可以顯著降低iNOS的表達(dá)，使NO水平下