注射用穿心鏈內(nèi)酯對大鼠重癥急性胰腺炎的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，觀察其對重癥急性胰腺炎(severeacute pancreatitis，SAP)大鼠胰腺組織中核因子-κB(nuclear transcriptionfactor-κB，NF-κB)表達(dá)的影響，以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)在血清中的含量變化，探討穿心蓮內(nèi)酯對大鼠SAP的治療作用及相關(guān)機(jī)制，為其在臨床SAP的廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:健康SD

2、雌性大鼠30只，體重為200～250克，隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組（sham-operation group，SO組），重癥急性胰腺炎模型組(severe acutepancreatitis model group，SAP組)、穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)組（andrographolidetreatment group，AND組），每組10只，在實(shí)驗(yàn)開始前禁食12h，不禁水。腹腔注射1％的戊巴比妥鈉3ml/kg將大鼠麻醉充分后，SAP組和AND組采用3.

3、5％牛磺膽酸鈉(0.1 ml/100g)逆行胰膽管注射(注射速度為0.2ml/min)建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，SO組開腹僅翻動腸管后即關(guān)腹。造模成功后，AND組于模型制備成功后立即給予穿心蓮內(nèi)酯(5ug/g)尾靜脈注射。SAP組則采用相同方法給予同等劑量的生理鹽水尾靜脈注射。造模6h后采用下腔靜脈抽血，隨后處死各組大鼠。肉眼觀察并記錄各組大鼠胰腺組織大體形態(tài)、胰周及腹腔腹水情況;檢測各組大鼠血清淀粉酶（Amylase，AMY）水平;

4、各組大鼠血清TNF-α的含量采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行測定;對HE染色后的各組大鼠胰腺組織進(jìn)行病理學(xué)評分;兩步免疫組化法（PV法）測定各組大鼠NF-κB p65蛋白在胰腺組織的表達(dá)情況。所有實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)的格式表示，結(jié)果采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組樣本比較采用方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、各組大鼠血清淀粉酶水平的變化:在造模后6h

5、，SAP組與AND組血清淀粉酶水平則明顯升高，SO組血清淀粉酶值無明顯改變(P＜0.05)，AND組血清淀粉酶水平較SAP組明顯降低(P＜0.05)。2、胰腺組織病理改變:(1)肉眼觀察:SO組解剖后，胰腺組織形態(tài)未見明顯異常改變，SAP組可見胰腺組織變灰白色，有明顯的充血水腫，局部可見暗紅色出血灶及灰褐色壞死灶，胰周可見皂化斑，并與周圍有粘連，胃腸有脹氣，腹腔有血性腹水，這說明牛黃膽酸鈉逆行胰膽管注射誘導(dǎo)的重癥急性胰腺炎大鼠模型成功建

6、立。AND組解剖后，可見淡黃色腹水，胰腺組織也有充血水腫，未見明顯出血樣改變，胃腸有少許脹氣，偶可見胰周有少許皂化斑，與胰周無明顯粘連等改變，但與SAP組相比較，程度明顯減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)光鏡下觀察:HE染色后，SO組大鼠胰腺組織在光鏡下可見其結(jié)構(gòu)完整，未見充血水腫、壞死、出血等改變，胰腺間質(zhì)內(nèi)也未見炎癥細(xì)胞浸潤、滲出等，而SAP組可見其正常的胰腺組織結(jié)構(gòu)被破壞，小葉結(jié)構(gòu)紊亂，葉間隔、小葉間隔增寬，腺泡腫脹

7、，局部可見出血及壞死，間質(zhì)內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤。AND組也可見葉間隔及小葉間隔有所增寬，胰腺腺泡細(xì)胞腫脹，有少許炎癥細(xì)胞浸潤，但未見明顯的壞死及出血，胰腺組織病理改變較SAP組不同程度減輕。(3)胰腺組織病理學(xué)評分:SAP組與AND組胰腺組織病理學(xué)評分均高于SO組(P＜0.05)，AND組較SAP組低(P＜0.05)。3、ELISA法測定各組大鼠血清TNF-α的結(jié)果:SO組TNF-α水平無明顯改變，而SAP組與AND組較SO組明顯升高(

8、P＜0.05)，AND組與SAP組相比較血清TNF-α水平有所降低(P＜0.05)。4、各組大鼠胰腺組織NF-κB p65蛋白的表達(dá):NF-κB p65在SO組大鼠胰腺組織中無明顯的陽性表達(dá)，而在SAP組胰腺組織中具有高表達(dá)，細(xì)胞核為其陽性表達(dá)的主要位置，同時在細(xì)胞質(zhì)中也有少許表達(dá)，棕黃色、深棕色為其陽性表達(dá)染色，AND組及SAP組胰腺組織中NF-κB p65蛋白的表達(dá)較SO組明顯增多(P＜0.05)，但AND組與SAP組相比較，NF-

9、κB p65蛋白的表達(dá)減弱，染色變淡(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1、經(jīng)穿心蓮內(nèi)酯治療后，SAP大鼠胰腺組織的病理損傷減輕，血清淀粉酶也下降，對SAP具有治療作用。2、穿心蓮內(nèi)酯可以減少SAP大鼠促炎因子TNF-α的大量釋放。3、穿心蓮內(nèi)酯可以抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB p65的活化表達(dá)。4、穿心蓮內(nèi)酯能夠通過抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB的表達(dá)，減少促炎因子TNF-α的表達(dá)，從而達(dá)到治療SAP的作用，這可能為穿心蓮內(nèi)酯治