別嘌醇鈉注射液對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎的治療作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過檢測(cè)別嘌醇鈉注射液在大鼠重癥急性胰腺炎模型中血清淀粉酶(AMY)、尿酸(UA)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子-a及胰腺組織NF-KB mRNA和TNF-a mRNA表達(dá),觀察別嘌醇鈉對(duì)SAP的治療作用和探討作用機(jī)制,為臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將120只健康成年雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、重癥急性胰腺炎模型組(B組)、低劑量別嘌醇鈉治療組(C組)、高劑量別嘌醇鈉治療組(D組),每組30只。通過腹腔注射大劑量的10％

2、L-精氨酸溶液制作大鼠SAP模型并注射別嘌醇鈉。各組造模完成后12h、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取6只大鼠處死并收集標(biāo)本,胰腺組織 HE染色后行光鏡病理學(xué)檢查,各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)血清淀粉酶(AMY)、UA、MDA;血清TNF-α值使用酶聯(lián)免疫吸附法(雙抗體夾心 ABC-ELISA法)測(cè)定;免疫組織化采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(SP法)檢測(cè)胰腺組織中NF-κB p65的表達(dá);實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)胰腺組織中NF-

3、κB mRNA、TNF-α mRNA的表達(dá);數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( X±s,n-6 )表示,采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理;樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析(方差不齊者采用H檢驗(yàn));兩者的相關(guān)性采用直線相關(guān)和直線回歸分析;如果 P<0.05,則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)A組大鼠全部存活;B組平均生存時(shí)間:60.58±34.84h,48h生存率:66.67％;C組平均生存時(shí)間:74.62±29.08h,48h

4、生存率:83.33％。D組平均生存時(shí)間;81.41±26.52h,48h生存率83.33％;兩個(gè)治療組與B組的平均生存時(shí)間及生存率比較具有差異(P<0.05)。(2)B組大鼠造模后血清AMY、MDA在各時(shí)間點(diǎn)上明顯高于A組(P<0.01),24h達(dá)到峰值;C組血清 AMY、MDA在24h,48h顯著低于B組(P<0.01),C組血清MDA在24h,48h高于D組(P<0.05);B組血清AMY與同組前一時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.

5、01);B組血清 MDA僅在24h與同組前一時(shí)間點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)B組大鼠造模后血清TNF-α、IOD值在各時(shí)間點(diǎn)明顯高于A組(P<0.01),在12h升高到峰值;C組在各時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α顯著低于B組(P<0.01);C組在24h、48h血清TNF-α水平顯著高于D組(P<0.01),C組的IOD值在24h、48h明顯高于D組(P<0.05);D組在48h血清TNF-α水平與同組前一時(shí)間點(diǎn)比較有顯著差異(P<

6、0.01);B、C和D組的IOD值與同組前一時(shí)間點(diǎn)之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)B、C、D組的胰腺組織病理評(píng)分顯著高于A組(P<0.01);C組病理評(píng)分均顯著低于B組(P<0.01),高于D組(P<0.01);C組、D組病理評(píng)分低于同組前一時(shí)間點(diǎn)病理評(píng)分(P<0.05)。(5)B組 NF-κB p65 mRNA和TNF-αmRNA值各時(shí)間點(diǎn)皆高于A組(P<0.05);TNF-αmRNA在12h升高到峰值;C組造模后NF

7、-κB p65 mRNA在12h,48h低于B組(P<0.05),在各時(shí)間點(diǎn)高于D組(P<0.05);C組TNF-αmRNA在各時(shí)間點(diǎn)低于B組(P<0.05),僅在12h高于D組(P<0.05);B組和C組NF-κBp65 mRNA、TNF-αmRNA與同組前一時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);D組 NF-κB p65 mRNA僅在24h與同組前一時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),D組TNF-αmRNA僅在12h與同組前一時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(6)血清TNF-α、MDA、IOD與胰腺病理評(píng)分;TNF-α及IOD;NF-κB p65 mRNA和TNF-α mRNA呈正相關(guān)(r=0.94、r=0.76、r=0.93 r=0.86、r=0.93,P<0.01)。結(jié)論:(1)通過采用腹腔注射大劑量的10％L-精氨酸的方法,能夠成功構(gòu)建了重癥急性胰腺炎的大鼠模型。(2)氧化應(yīng)激( OS)及其脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA參與大鼠重癥急性胰腺炎的發(fā)病過程。(3)L-精氨酸