真空膜結(jié)晶蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、X-射線晶體衍射分析在分子生物學(xué)中起著非常重要的作用，因此需要有適合做衍射分析的蛋白質(zhì)晶體。然而，生物大分子的許多特性不同于有機(jī)和無(wú)機(jī)的小分子，例如：靜電學(xué)性質(zhì)、較復(fù)雜的形狀及物理化學(xué)不穩(wěn)定性等等，這就使生物大分子的結(jié)晶過(guò)程變得較為復(fù)雜。因此，獲得質(zhì)量完美的蛋白質(zhì)晶體成為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測(cè)定的主要瓶頸，需要探索新的結(jié)晶方法以制備蛋白質(zhì)等生物大分子晶體。用膜結(jié)晶技術(shù)結(jié)晶蛋白質(zhì)可得到適合于衍射分析的大分子蛋白質(zhì)晶體。 本文首先采用了聚偏氟

2、乙烯中空纖維微孔膜對(duì)真空膜結(jié)晶溶菌酶進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究?？疾炝四は掠握婵斩?、蛋白質(zhì)濃度、料液流速、添加劑、pH和離子強(qiáng)度對(duì)溶劑跨膜通量及溶菌酶晶體質(zhì)量的影響。結(jié)果表明：真空度應(yīng)控制在0.015MPa左右；溶菌酶真空膜結(jié)晶的最佳濃度為20mg·mL<'-1>；結(jié)晶溶液的流速以288μm·s<'-1>為宜；結(jié)晶溶液中加入一定添加劑如丙三醇、DMSO等，可以有效提高溶劑跨膜通量，改善晶體質(zhì)量；在相同離子強(qiáng)度下，pH值越大膜通量越低，在不同的pH值

3、下可以得到不同形狀的晶體。 另外，本文用滲透膜結(jié)晶法進(jìn)行了其它幾種蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白V、脂肪酶)的膜結(jié)晶，研究了操作條件對(duì)蛋白質(zhì)滲透膜結(jié)晶過(guò)程的影響，優(yōu)化了幾種蛋白質(zhì)的結(jié)晶條件，評(píng)價(jià)了不同結(jié)晶條件下的溶劑跨膜通量，探討了沉淀劑和添加劑對(duì)蛋白質(zhì)滲透膜結(jié)晶的作用機(jī)理，并對(duì)最后得到的蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行了初步分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：對(duì)于牛血清白蛋白V的滲透膜結(jié)晶過(guò)程，最佳結(jié)晶條件為17～25℃，pH6.3的KH<,2>PO<,4>-Na<,2