地榆總皂苷促血小板生成作用及其機理研究.pdf

1、目的：探討地榆總皂苷的促血小板生成作用及其對血小板生成起重要調(diào)控作用的靶點TPO/c-mpl及SCF/c-kit的影響，以明確地榆總皂苷促血小板生成作用的機理。
　　方法：通過體外及體內(nèi)實驗研究了地榆總皂苷的促血小板生成作用及其機理，體內(nèi)研究方法：采用環(huán)磷酰胺造成小鼠血小板減少癥動物模型的方法，于造模的同時給予地榆總皂苷（1，0.5，0.1mg/kg）溶液進行治療，于造模后第4、7、10天眼叢取血測定小鼠外周血象指標。體外研究方法

2、：①MTT法檢測地榆總皂苷對TPO依賴性Baf3/Mpl細胞增殖水平的影響。②CCK8法檢測地榆總皂苷對IL-3依賴性Baf3細胞增殖水平的影響。③CCK8法檢測地榆總皂苷對IL-3依賴性32D細胞增殖水平的影響。④Giemsa染色法檢測地榆總皂苷對32D細胞形態(tài)學的影響。⑤RT-PCR法檢測地榆總皂苷對Baf3/Mpl細胞中TPO受體mRNA表達水平的影響。⑥RT-PCR法檢測地榆總皂苷對32D細胞中c-kit mRNA表達水平的影響

3、。⑦熒光探針法檢測地榆總皂苷對HEL細胞中c-kit mRNA表達水平的影響。
　　結(jié)果：體內(nèi)實驗結(jié)果：地榆總皂苷能顯著的升高造模后小鼠的白細胞、紅細胞及血小板水平。體外實驗結(jié)果：①在不含TPO的培養(yǎng)條件下，Baf3/Mpl細胞增殖明顯受抑制；在含TPO的培養(yǎng)條件下，Baf3/Mpl細胞增殖明顯；當同時加入TPO和質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細胞增殖更為明顯，且優(yōu)于TPO單獨處理組；在不含 TPO培養(yǎng)條件下，地榆總皂苷

4、單獨處理細胞，也能明顯促進細胞增殖。②在不含IL-3的培養(yǎng)條件下，Baf3細胞增殖明顯受抑制；在含IL-3的培養(yǎng)條件下，Baf3細胞增殖明顯；當同時加入IL-3和質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細胞增殖更為明顯，且優(yōu)于IL-3單獨處理組；在不含IL-3培養(yǎng)條件下，地榆總皂苷單獨處理細胞，也能明顯促進細胞增殖，且呈時間依賴。③在缺乏IL-3培養(yǎng)條件時，細胞增殖明顯受抑制，但在含IL-3的培養(yǎng)條件下，32D細胞增殖明顯；在不含 IL

5、-3的培養(yǎng)條件下加入質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細胞數(shù)量明顯增加，并呈時間依賴。④質(zhì)量濃度為40μg/ml的地榆總皂苷單獨處理32D細胞4天后，多倍體巨核細胞數(shù)量增加，且胞體變大；當培養(yǎng)時間延長至9天時可明顯誘導多倍體巨核細胞數(shù)增加，促進巨核細胞成熟分化。⑤質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷單獨處理細胞48h能明顯上調(diào)Baf3/Mpl細胞中TPO受體mRNA的表達水平。⑥質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷單獨處理細胞48