促血小板生成因子Tmax的發(fā)酵、純化及藥效學(xué)、作用機(jī)制研究.pdf

1、燃燃目錄～中文摘要??????????????????????????????1A b s t r a c t ????????????????????????????????????????．．2第一部分 促血小板增生因子T m a x 的發(fā)酵、純化前言??????????????????????????????????????????．．3 日U 舌??????????????????????????????????????????

2、·．j材料和方法?????????????????????????????6結(jié)果??????????????????????????????????????????1 1討論??????????????????????????????????????????1 8第二部分 促血小板增生因子T m a x 作用機(jī)制的初步研究前言??????????????????????????????????????????2 0 日U 舌?

3、?????????????????????????????????????????Z U材料和方法????????????????????????????．．2 2結(jié)果???????????????????????????????．．2 6討論??????????????????????????????????????????2 8第三部分 促血小板增生因子T m a x 在急性放射損傷中的應(yīng)用研究前言?????????????????

4、?????????????????????????2 9 日U 舌??????????????????????????????????????????Z y材料和方法????????????????????????????．．3 l結(jié)果???????????????????????????????．．3 2討論??????????????????????????????????????????3 678^ Z■■■～～～～～一～～～～～

5、～～一～～～～～～～一～～～一一一～～～～一～～～～～一～～～～～～～～～一～一～～～～～～～～～～～～～～～～～～一～～～～～～～～～～～～～～望～～展獻(xiàn)～和文～ 結(jié)考述 總參綜復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tA m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e sc a t a l y z et h ea m i n o a c y l a t i o no f t h e

6、 i rc o g n a t et r a n s f e rR N A s ( t R N A ) a n d p l a y a c r u c i a lr o l ei np r o t e i ns y n t h e s i s ．H o w e v e r , d u r i n g e v o l u t i o n ，h u m a n t R N A s y n t h e t a s e sh a v ea c

7、q u i r e d l a t e n ts i g n a l i n g a c t i v i t i e st h a tC a n b er e l e a s e db yp r o c e s s i n go f t h ei n a c t i v ef u l l l e n g t he n z y m ea n d s e c r e t i o no f t h ea c t i v es i g n a

8、l i n gm o l e c u l e ．F o ri n s t a n c e ，i th a sb e e ns h o w nt h a tt h eh u m a nt y r o s y l - t R N As y n t h e t a s ec a nb e s p l i t i n t ot w of r a g m e n t s w i t l l d i s t i n c ts i g n a l i

9、 n ga c t i v i t i e s ．T h e N - t e r m i n a lf r a g m e n to ft h et y r o s y l - t R N As y n t h e t a s e a c t s a s ac h e m o a t t r a c t a n tm o l e c u l e a n dp r o m o t e sm e g a k a r y o c y t ed

10、 e v e l o p m e n t ，e v e n t u a l l yl e a d i n g t o a ni n c r e a s e i np l a t e l e tp r o d u c t i o n ．T m a xi st h ef u l l —l e n g t hh u m a n t y r o s y l —t R N As y n t h e t a s ee n g i n e e r e

11、 d 謝t ha Y 3 4 1 a m i n o a c i dc h a n g e t h a tu n m a s k s i t st h r o m b o p o i e t i c a c t i v i t y ．I nt h i ss t u d y , w ee x p r e s s e dc o d o n —o p t i m i z e dr h T y r R S i n E ．c o l iu n d

12、 e r f e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s ．T h es o l u b l ep r o t e i nw a s p u r i f i e db y t h r e e —s t e pp u r i f i c a t i o np r o c e s su s i n gc a t i o ne x c h a n g ec h r o m a t o g r a p h

13、y , g e lf i l t r a t i o n c h r o m a t o g r a p h ya n da n i o ne x c h a n g ec h r o m a t o g r a p h y ．T h e p r o t e i n i s c h a r a c t e r i z e d b y W e s t e r nb l o t w i t h m o n o c l o n a la n

14、t i b o d i e s 、S D S —P A G E ，M A S S ，H P L Ca n dN ·t e r m i n a l s e q u e n c i n g ．B i o l o g i c a la c t i v i t yi sv e r i f i e db yu s i n ga na m i n o a c y l a t i o na s s a y ．I n r a t e f f

15、i c a c ys t u d y , T m a xw a ss h o w n t o h a v ep l a t e l e t s t i m u l a t i n ga c t i v i t y a t t h ed o s e o f10 0 0 } t g ／k g ，c o n f i r m i n gt h et h r o m b o p o i e t i c e f f e c t so fT m a

16、xo na n e m i ao fm y e l o s u p p r e s s i o ni n d u c e d b y 丫i r r a d i a t i o n i nS D r a t s ．O n e o f t h ec r u c i a ls t e p si n p l a t e l e tp r o d u c t i o ni st h em i g r a t i o na n d a d h e

17、s i o no f t h ei m m a t u r em e g a k a r y o c y t e st o t h e b o n em a r r o we n d o t h e l i a l c e l l s t h a t d e l i n e a t e t h es i n u s o i d s ，a n i n t e r a c t i o n t h a t f a c i l i t a t

18、e s d i f f e r e n t i a t i o n a n d m a t u r a t i o n ．O u re x p e r i m e n t c o n f i r m e dt h a tT m a x a c t a sac h e m o a t t r a c t a n tf o rt h e M - 0 7 ec e l l s ；I na d d i t i o n ，T m a xe n h

19、 a n c e I L - 8p r o d u c t i o n f r o m m o n o c y t ei nH L 一6 0c e l l s ．K e y W o r d s ：h u m a n t y r o s y l - t R N A s y n t h e t a s e 、t h r o m b o c y t i c 、f e r m e n t a t i o np u r i f i c a t i