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1、目的: 80年代以來(lái),臍血作為造血干/祖細(xì)胞來(lái)源治療血液病患者的有效方法受到人們關(guān)注,由于臨床血液疾病治療的迫切需要,臍血造血干/祖細(xì)胞的臨床應(yīng)用主要應(yīng)用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤及某些實(shí)體腫瘤的治療。臍血中含有較豐富的原始、能重建長(zhǎng)期造血的干/祖細(xì)胞,具有較強(qiáng)的自我增殖、多向分化的能力,是造血干/祖細(xì)胞又一豐富來(lái)源。紅細(xì)胞生成素(Epo)是一種維系紅系祖細(xì)胞生存,增殖及分化成熟的重要造血調(diào)控因子。它通過(guò)與紅系祖細(xì)胞表面紅細(xì)胞生成素受體
2、(EpoR)結(jié)合,可調(diào)節(jié)紅系細(xì)胞增殖和分化。 人參是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的“補(bǔ)氣”要藥,人參總皂苷(TSPG)是其主要藥物有效成分。我室既往研究表明,TSPG能協(xié)同造血生長(zhǎng)因子(Epo)促進(jìn)CD34+造血干/祖細(xì)胞(HSC/HPC)向紅系細(xì)胞增殖分化;特別有意義的是,若不添加外源性生長(zhǎng)因子TSPG則無(wú)此作用,提示TSPG以細(xì)胞因子依賴的方式促進(jìn)紅系細(xì)胞發(fā)生。因此,我們?cè)O(shè)想TSPG可能通過(guò)調(diào)控EpoR發(fā)揮促進(jìn)紅系細(xì)胞發(fā)生的作用。本研究以分
3、離純化的人臍血CD34+ HSC/HPC為靶細(xì)胞,初步探討TSPG對(duì)CD34+細(xì)胞EpoR表達(dá)的影響。 方法: 1、免疫磁珠法分選出臍血CD34+HSC/HPC,于體外培養(yǎng),50 mg/LTSPG和100ng/ml干細(xì)胞因子(SCF)加入到CD34+ HSC/HPC的培養(yǎng)體系中作為T(mén)SPG組;對(duì)照組中只加入100ng/ml SCF。兩組均培養(yǎng)24小時(shí)后檢測(cè)以下指標(biāo)。 2、采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)TSPG組與對(duì)照組E
4、poR陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。 3、采用半定量RT-PCR技術(shù)分別測(cè)定TSPG組與對(duì)照組細(xì)胞EpoRmRNA的表達(dá)。 4、采用激光共聚焦顯微鏡成像術(shù)觀察TSPG組與對(duì)照組細(xì)胞膜EpoR的分布。 5、采用紫外-可見(jiàn)分光光度儀檢測(cè)TSPG組與對(duì)照組細(xì)胞血紅蛋白的含量的變化。 結(jié)果: 1、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示:TSPG組細(xì)胞膜EpoR表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞百分率增加,與對(duì)照組相比差異有顯著性,P=0.035。
5、2、半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:TSPG組細(xì)胞EpoR mRNA表達(dá)增加,與對(duì)照組相比差異有顯著性,P=0.016。 3、激光共聚焦顯微鏡成像術(shù)顯示:TSPG組細(xì)胞膜熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組。 4、血紅蛋白測(cè)定檢測(cè)結(jié)果顯示:50mg/L TSPG作用CD34+HSC/HPC24h后,其血紅蛋白的合成增加,與對(duì)照組相比差異有顯著性,P=0.037。 結(jié)論: 1、50 mg/L TSPG能夠使CD34+造血
6、干/祖細(xì)胞膜EpoR的陽(yáng)性表達(dá)率增多。 2、50 mg/L TSPG能夠使CD34+造血干/祖細(xì)胞EpoR mRNA的表達(dá)增多。 3、50 mg/L TSPG可促進(jìn)CD34+造血干/祖細(xì)胞向紅系分化。 目的: 白血病是人類好發(fā)的惡性腫瘤,是由于造血干細(xì)胞增殖分化異常而導(dǎo)致的惡性增殖性疾病。迄今白血病的治療仍主要采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療,但此療法副作用大,復(fù)發(fā)率高,而且對(duì)正常機(jī)體免疫與造血系統(tǒng)有極大的損害。
7、人參總皂苷(TSPG)是人參“補(bǔ)氣生血”或促進(jìn)造血的有效成分。我們既往研究表明:TSPG對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖有抑制作用,并可誘導(dǎo)其向終末細(xì)胞分化。但TSPG對(duì)白血病細(xì)胞增殖抑制及誘導(dǎo)分化的機(jī)理尚不清楚。已知K562細(xì)胞膜表面EpoR起著轉(zhuǎn)導(dǎo)抗凋亡信號(hào)作用,我們?cè)O(shè)想TSPG可能通過(guò)抑制EpoR蛋白的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡,從而抑制其增殖。本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)觀察TSPG對(duì)K562細(xì)胞的EpoR表達(dá)的影響,旨在闡述人參抗白
8、血病作用機(jī)理,這對(duì)于我們?yōu)榕R床尋找誘導(dǎo)白血病凋亡的藥物具有重要意義。 方法: 1、體外常規(guī)培養(yǎng)白血病細(xì)胞株K562。200 mg/L TSPG分別作用K562細(xì)胞0h、24h、48h、72h,進(jìn)行以下檢測(cè)。 2、采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定200 mg/L TSPG作用K562細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞膜表面EpoR表達(dá)的陽(yáng)性率。 3、采用半定量RT-PCR測(cè)定200mg/L TSPG作用K562細(xì)胞24h、
9、48h、72h后EpoR mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果: 1、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示K562細(xì)胞膜表面EpoR表達(dá)的陽(yáng)性率隨著200mg/L TSPG作用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少,P<0.05。 2、半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示K562細(xì)胞EpoR mRNA表達(dá)隨200mg/L TSPG作用時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著減少,P<0.01。 結(jié)論: 1、200mg/L TSPG可使K562細(xì)胞膜表面EpoR的表達(dá)陽(yáng)性率減少
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