促紅細(xì)胞生成素對(duì)改善新生豬胰島細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．研究促紅細(xì)胞生成素在體外對(duì)新生豬胰島細(xì)胞增殖和功能的影響。2．研究促紅細(xì)胞生成素干預(yù)后，體外培養(yǎng)的新生豬胰島細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3基因表達(dá)的改變。 方法：新生3-5天小豬，取胰、分離、純化，檢測(cè)胰島細(xì)胞的純度和活性。獲得的新生豬胰島細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組與促紅細(xì)胞生成素共孵育，培養(yǎng)5-7天，細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線；MTT法測(cè)細(xì)胞增殖活性；葡萄糖刺激試驗(yàn)檢測(cè)胰島功能；流式細(xì)胞儀和EB

2、／AO熒光染色檢測(cè)凋亡率；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期；RT-PCR法檢測(cè)胰島細(xì)胞PDX-1、GlUT-2、bcl-2、bax、caspase-3基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：經(jīng)促紅細(xì)胞生成素處理5-7天后，實(shí)驗(yàn)組新生豬胰島細(xì)胞數(shù)目比對(duì)照組增多(P<0.01)，低糖、高糖刺激的胰島素分泌水平與對(duì)照組無(wú)差別(P>0.05)，流式細(xì)胞儀和EB／AO熒光染色檢測(cè)的調(diào)亡率較對(duì)照組顯著降低(P<0.001)，RT-PCR的結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組PDX-l

3、mRNA表達(dá)較對(duì)照組稍有上調(diào)(P<0.05)，G1UT-2mRNA表達(dá)無(wú)明顯改變(P>0.05)，bcl-2mRNA較對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P<0.001)，而baxmRNA和caspase-3 mRNA明顯減弱(P<0.01)。 結(jié)論： 1．促紅細(xì)胞生成素有可能促進(jìn)新生豬胰島細(xì)胞的體外增殖分化，但對(duì)細(xì)胞的功能沒(méi)有影響。 2．促紅細(xì)胞生成素對(duì)體外培養(yǎng)的新生豬胰島細(xì)胞有抗凋亡作用，可能通過(guò)上調(diào)抗凋亡基因bcl-2，