減毒活菌卡介苗(BCG)接種對哮喘大鼠TH1-TH2平衡和氣道細胞外基質(zhì)重塑的影響.pdf

1、目的：大鼠多次接種BCG后，成功復制哮喘大鼠模型，誘導哮喘發(fā)作。探討：(1)卡介苗接種對哮喘大鼠Th1/Th2平衡的影響。(2)卡介苗接種是否能夠抑制及預(yù)防哮喘氣道炎癥及氣道細胞外基質(zhì)的重塑作用。(3)卡介苗多次接種對哮喘大鼠的防治作用是否優(yōu)于卡介苗單次接種。
　　 方法：將32只清潔級SD雄性幼鼠隨機分成4組：正常對照組、哮喘模型組、卡介苗單次接種組(BCG1)、卡介苗多次接種組(BCG3)。對照組采用生理鹽水致敏和激發(fā)，哮喘

2、組采用卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)，卡介苗接種組在致敏前分別給予卡介苗皮內(nèi)單次和多次注射。最后一次激發(fā)24小時后，行動物肺功能測定氣道阻力變化；收集肺泡灌洗液行細胞分類計數(shù)；肺組織行HE染色；采用醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)測量支氣管管壁周長、氣道面積和氣道平滑肌面積。酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠血清中IFN-γ、IL-4和MMP-9、TGF-β1含量的變化；免疫組織化學法檢測各組大鼠肺組織MMP-9、TGF-β1的表達變化并進行定量分析。
　　

3、 結(jié)果：
　　 (1)肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)與嗜酸性粒細胞計數(shù)(×106/L)：對照組分別為(5.40±1.52，0.47±0.29)，哮喘組為(17.44±5.89，2.21±0.98)，BCG1為(14.61±2.15，1.95±0.34)，BCG3(8.78±1.26，1.19±0.27)。對照組、BCG1組、BCG3組與哮喘組比較，BALF中細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞計數(shù)均有統(tǒng)計學意義。肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞計

4、數(shù)與血清TGF-β1水平呈正相關(guān)。
　　 (2)病理結(jié)果顯示：哮喘模型組肺組織可見明顯的炎細胞浸潤，氣道粘膜破壞，杯狀細胞增生，黏液分泌量增加，基底膜增厚及氣道血管平滑肌增殖?？ń槊缃臃N組能明顯減少上述改變，其中BCG3組表現(xiàn)優(yōu)于BCG1組。
　　 (3)大鼠血清IFN-γ和IL-4水平測定：正常對照組(30.36±3.65)和BCG3組(22.66±2.05)血清IFN-γ水平較哮喘組(10.92±1.93)明顯升高。

5、BCG1組(18.20±1.73)血清IFN-γ水平較哮喘組升高較BCG3降低。血清IFN-γ水平與血清MMP-9水平呈顯著負相關(guān)。哮喘組(30.50±1.69)血清IL-4水平較對照組(11.67±1.48)和BCG3(15.82±0.88)顯著升高。BCG1組（18.83±1.11）血清IL-4水平較BCG3組升高較哮喘組降低。血清IL-4水平與血清MMP-9水平呈顯著正相關(guān)。
　　 (4)肺功能檢測結(jié)果：哮喘組（10.71

6、±2.47）和BCG1組（10.81±1.05）氣道基本壓力曲線峰值水平低于正常對照組（13.02±2.44）和BCG3組（13.15±1.471）（F為16.64，P＜0.05）。BCG3組與對照組氣道基本峰值水平無統(tǒng)計學差異。經(jīng)靜脈注射乙酰膽堿后，哮喘組和BCG1組大鼠氣道壓力曲線峰值明顯下降。
　　 (5)大鼠血清MMP-9和TGF-β1水平測定：對照組分別為(107.59±4.56，147.96±3.01)，哮喘組分別為

7、(207.13±5.30，268.20±2.00)，BCG1分別為（157.31±7.42，199.12±4.50），BCG3分別為(130.75±7.00，183.12±4.21)。對照組、BCG1組、BCG3組與哮喘組比較均有統(tǒng)計學意義；相關(guān)性分析結(jié)果顯示：血清MMP-9水平與管壁厚度變化成正相關(guān)；血清TGF-β1水平與管壁厚度變化成正相關(guān)。
　　 (6)MMP-9和TGF-β1免疫組織化學圖像半定量分析，以陽性表達的平均灰

8、度值為統(tǒng)計量：MMP-9：哮喘組MMP-9陽性表達（128.86±3.80）高于正常對照組;BCG1組（128.39±4.69）陽性表達高于正常對照組而低于哮喘組;BCG3組（155.41±4.35）與對照組間無顯著統(tǒng)計學差異。MMP-9在肺組織的陽性表達與氣道管壁厚度呈正相關(guān)。TGF-β1:哮喘組TGF-β1陽性表達（118.18±5.06）高于正常對照組；BCG1組（123.94±2.43）與BCG3組（159.43±5.77）陽性

9、表達高于對照組而低于哮喘組；各組間有顯著統(tǒng)計學差異。TGF-β1在肺組織的陽性表達與氣道管壁厚度呈正相關(guān)。
　　 (7)分析比較各組大鼠氣道支氣管壁厚度、平滑肌層厚度結(jié)果顯示：哮喘模型組（98.17±9.38、26.77±6.79）、BCG1組（81.21±8.71、22.53±4.03）和BCG3組（72.11±8.70、16.98±1.66）支氣管壁厚度、平滑肌層厚度均大于正常對照組（61.71±8.78、12.22±2.6

10、3）。其中，BCG3組和BCG1組支氣管壁厚度、平滑肌層厚度測量值少于哮喘模型組，BCG3組支氣管壁厚度、平滑肌層厚度測量值少于BCG1組。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過抗原致敏和反復霧化吸入OVA激發(fā)，成功建立了具有氣道重塑特征和氣道反應(yīng)性增高的大鼠哮喘模型。
　　 2、哮喘組BALF中細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞計數(shù)明顯升高，同時伴有血清中IL-4水平升高及IFN-γ水平降低。病理可見以嗜酸性粒細胞增多為主的炎癥細

11、胞浸潤。
　　 3、哮喘模型組血清中TGF-β1，MMP-9水平及其在肺組織中的陽性表達明顯增加，且與氣道管壁厚度成正相關(guān)，二者與哮喘的氣道重塑具有相關(guān)性。
　　 4、卡介苗的接種能夠明顯減輕以Eos為主的哮喘氣道炎癥細胞浸潤，降低氣道高反應(yīng)性。升高了血清中IFN-γ水平，同時降低了IL-4水平，從而部分糾正了Th1/Th2失衡。
　　 5、卡介苗接種降低了血清中及肺組織中的MMP-9和TGF-β1表達水平，減少