黃皮葉提取物對哮喘大鼠氣道炎癥的抑制及調(diào)節(jié)細胞因子Th1-Th2平衡的作用.pdf

1、目的:我們將通過黃皮葉的有效成分的提取，哮喘大鼠模型的建立，測定外周血中EOS數(shù)目、肺組織內(nèi)NO含量及Th1分泌的IFN-γ及Th2分泌IL-4的含量，從整體動物水平研究不同濃度黃皮葉提取物對哮喘大鼠氣道炎癥及Th1/Th2細胞因子的調(diào)節(jié)作用，從而初步探討黃皮葉提取物對哮喘氣道炎癥調(diào)節(jié)的作用機制。
　　方法:用乙醇回流提取法提取黃皮葉的有效成分，卵清蛋白(OVA)致敏、激發(fā)建立大鼠哮喘模型，并以不同濃度黃皮葉提取物灌胃，采用蘇木素

2、伊紅(HE)染色觀察大鼠肺組織病理改變，測大鼠外周血中嗜酸性粒細胞(EOS)數(shù)目，用硝酸還原酶法測大鼠肺組織中一氧化氮(NO)的含量，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測大鼠血清細胞因子IFN-γ、IL-4的情況，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測大鼠肺組織中IFN-γmRNA、IL-4mRNA的表達水平。
　　結(jié)果:(1)HE染色及顯微鏡觀察:哮喘組大鼠支氣管、肺泡及肺間質(zhì)充斥大量炎癥細胞、粘膜層腫脹充血、皺折增多。地

3、塞米松組及黃皮葉提取物組上述炎癥反應明顯減輕。黃皮葉提取物低濃度組、黃皮葉提取物中濃度組炎癥情況較黃皮葉提取物高濃度組嚴重，較模型組有所減輕，正常對照組肺組織結(jié)構(gòu)正常，無明顯炎癥表現(xiàn)。(2)外周血中嗜酸性粒細胞(EOS)計數(shù):模型組（A組）大鼠外周血中嗜酸性粒細胞數(shù)目明顯高于正常對照組(P＜0.01)，藥物組外周血中嗜酸性粒細胞數(shù)目均低于模型組(P＜0.05)，且藥物組嗜酸性粒細胞數(shù)目較正常對照組高(P＜0.05)。藥物組中，黃皮葉提取

4、物低濃度組嗜酸性粒細胞數(shù)目高于黃皮葉提取物中濃度組(P＜0.05)，黃皮葉提取物中濃度組嗜酸性粒細胞數(shù)目高于黃皮葉提取物高濃度組(P＜0.05)，黃皮葉提取物高濃度組嗜酸性粒細胞數(shù)目高于地塞米松組(P＜0.05)。(3)硝酸還原酶法測哮喘大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮(NO)含量:模型組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量明顯高于正常對照組(P＜0.01)，藥物組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量均低于模型組(P＜0.05)，且藥物組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量較正常對照

5、組高(P＜0.05)。黃皮葉提取物組中，黃皮葉提取物低濃度組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量高于黃皮葉提取物中濃度組(P＜0.05)，黃皮葉提取物中濃度組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量高于黃皮葉提取物高濃度組(P＜0.05)，黃皮葉提取物高濃度組大鼠肺組織內(nèi)一氧化氮含量高于地塞米松組(P＜0.05)。(4)ELISA法檢測各組哮喘大鼠血清中IFN-γ、IL-4蛋白含量與RT-PCR檢測大鼠肺組織中IFN-γ、IL-4mRNA含量:模型組大鼠血清及肺組

6、織中IFN-γ含量明顯低于正常對照組(P＜0.01);黃皮葉提取物高濃度組含量高于黃皮葉提取物中濃度組(P＜0.05);黃皮葉提取物中濃度組高于黃皮葉提取物低濃度組(P＜0.05);黃皮葉提取物低濃度組高于模型組(P＜0.05)，黃皮葉提取物高濃度組低于地塞米松組(P＜0.05)，地塞米松組低于正常對照組(P＜0.05)。模型組大鼠大鼠血清及肺組織中IL-4含量明顯高于正常對照組(P＜0.01);黃皮葉提取物高濃度組低于黃皮葉提取物中濃

7、度組(P＜0.05);黃皮葉提取物中濃度組低于黃皮葉提取物低濃度組(P＜0.05);黃皮葉提取物低濃度組低于模型組(P＜0.05)，黃皮葉提取物高濃度組低于地塞米松組(P＜0.05)，地塞米松組高于正常對照組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、黃皮葉提取物能抑制哮喘的氣道炎癥，且與黃皮葉的濃度呈量效關(guān)系。
　　2、不同濃度黃皮葉提取物通過下調(diào)IL-4的表達，上調(diào)IFN-γ的表達調(diào)節(jié)哮喘大鼠Th1/Th2細胞因子失衡