BCG對哮喘大鼠Th1-Th2平衡的調(diào)節(jié)及其對血管重塑的影響.pdf

1、目的：研究BCG對哮喘大鼠氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性的預(yù)防作用，探討B(tài)CG對Th1/Th2平衡的調(diào)節(jié)及其對血管重塑的影響。
　　 方法：清潔級SD大鼠40只（雄性，4周齡，體重50-100克之間），隨機(jī)分成正常對照組、哮喘模型組、多BCG組、BCG干預(yù)組，每組10只。哮喘模型組于實驗第1、8天對大鼠腹腔注射OVA100mg和氫氧化鋁100mg（混于9g/L生理鹽水2ml中）進(jìn)行致敏，第15天起將幼鼠置于非完全密閉的自制熏箱中霧化吸入

2、2％OVA5ml，每次30min，隔日1次，共激發(fā)20次。多BCG組在OVA致敏前7、3、1天，每只幼鼠分別皮下注射BCG0.025mg，余步驟同哮喘組。
　　 BCG干預(yù)組則于激發(fā)前7d（第8天）給予皮下注射BCG0.025mg，第15天開始每日激發(fā)前30min給予皮下注射BCG，劑量同上。余步驟同哮喘組。正常對照組以生理鹽水代替OVA．，步驟同哮喘組。
　　 最后一次激發(fā)24小時后，1％戊巴比妥鈉麻醉動物。進(jìn)行肺功能

3、檢查；收集細(xì)胞灌洗液，計數(shù)細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞；部分肺組織行病理切片，HE染色；免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠肺組織中VEGF及內(nèi)皮抑素的表達(dá)變化，并應(yīng)用圖像分析軟件測量VEGF及內(nèi)皮抑素的相對表達(dá)強(qiáng)度；采用計算機(jī)圖象分析技術(shù)測定氣道壁厚度和血管密度；用ELISA法定量檢測血清中IL-4、IFN-γ、VEGF及其內(nèi)皮抑素的水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、肺功能檢測結(jié)果：四組在給于生理鹽水及6.25μg/kg乙酰膽堿時無差別

4、。哮喘模型組在給于12.5μg/kg、25μg/kg、50μg/kg乙酰膽堿時呼氣峰值均低于其他三組;多BCG組和BCG干預(yù)組呼氣峰值較正常對照組低，兩者無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2、肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)：哮喘模型組分別為（17.15±3.02）×106、（2.19±0.30）×106，多BCG組分別為（8.78±2.00）×106、（1.19±0.31）×106，BCG干預(yù)組分別為（11.87±2.31）×1

5、06、（1.49±0.30）×106，正常對照組分別為（5.40±1.52）×106、（0.51±0.18）×106。哮喘組高于其他三組，多BCG組低于BCG干預(yù)組，兩者有統(tǒng)計學(xué)意義，兩組均高于正常對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3、病理結(jié)果：哮喘模型組大鼠肺組織可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞增生、黏液分泌增加、平滑肌細(xì)胞增生、管壁厚度增加、血管增生。應(yīng)用BCG干預(yù)后能明顯減輕上述改變。
　　 4、圖像分析結(jié)果：哮喘模型

6、組管壁厚度、血管密度(98.17±9.38，203.88±14.15)高于其他三組，多BCG組（72.10±8.70，138.13±9.35）低于BCG干預(yù)組(80.34±9.23，177.03±7.52)，有統(tǒng)計學(xué)意義，兩組均高于正常對照組（61.70±8.77，97.78±7.27），有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5、肺組織行免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：VEGF、內(nèi)皮抑素的平均光密度值在哮喘模型組（0.41±0.02，0.47±0.03）

7、高于其他三組，多BCG組（0.24±0.02，0.31±0.02）低于BCG干預(yù)組(0.33±0.02，0.38±0.03)，有統(tǒng)計學(xué)意義，兩組均高于正常對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 6、血清行ELISA法檢測結(jié)果：哮喘模型血清中IL-4、VEGF、內(nèi)皮抑素及VEGF/內(nèi)皮抑素的表達(dá)水平分別為33.98±2.35、59.54±6.86、3.54±0.53、17.01±2.48，正常對照組分別為11.43±2.72、10.60±3

8、.93、1.04±0.37、5.81±2.41，多BCG組分別為16.46±1.92、21.33±2.88、1.84±0.36、9.26±1.72，BCG干預(yù)組分別為20.89±2.29、37.79±6.33、2.56±0.55、13.62±2.50。哮喘模型組的表達(dá)水平高于其他三組，多BCG組低于BCG干預(yù)組，兩組均高于正常對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。哮喘模型組血清中IFN-γ（10.92±1.93）的表達(dá)水平明顯低與其他三組，有顯著性差異

9、，多BCG組（22.66±2.05）高于BCG干預(yù)組（18.46±1.48），有統(tǒng)計學(xué)差異。兩組均低于正常對照組（30.36±3.65），有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 7、相關(guān)性分析結(jié)果：哮喘模型組大鼠血管密度與管壁厚度呈顯著正相關(guān)，與血清中IL-4、VEGF及VEGF/內(nèi)皮抑素的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，與IFNγ呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1、BCG可明顯降低哮喘大鼠IL-4的表達(dá)水平，提高IFN-γ的表達(dá)水平。

10、提示BCG可以調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡。
　　 2、BCG可明顯降低哮喘大鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞，提示BCG可能通過上調(diào)IFN-γ的表達(dá)水平，降低IL-4的表達(dá)水平來減輕氣道炎癥。且多BCG組較BCG干預(yù)組下降明顯。
　　 3、BCG可明顯降低哮喘大鼠氣道阻力，提示BCG可能通過上調(diào)IFN-γ的表達(dá)水平，降低IL-4的表達(dá)水平來減輕氣道高反應(yīng)性。兩組無明顯差別。
　　 4、BCG可明顯降低哮喘大鼠VE