白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠氣道細(xì)胞外基質(zhì)重塑的影響.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase9，MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1，TIMP-1）與氣道細(xì)胞外基質(zhì)沉積的關(guān)系，及孟魯司特（Montelukast，MK）對哮喘大鼠氣道細(xì)胞外基質(zhì)重塑的影響。
　　 方法

2、：將清潔級SD雄性大鼠24只，體重180-200克之間，隨機(jī)分成三組（每組8只）：正常對照組、哮喘模型組、孟魯斯特治療組。模型組和治療組大鼠分別與1天和8天于腹膜腔注射含OVA100mg、AL（OH3）100 mg的混懸液2ml和百日咳疫苗1 ml（含50億個菌苗）致敏。于第15天將大鼠置于20cm×30cm×40cm不完全密閉的自制熏箱中霧化吸入OVA，其濃度由1％逐漸遞增到1.5％、2％、2.5％、3％，每激發(fā)4次后增加一次OVA濃

3、度，每次30分鐘，隔日一次，共激發(fā)20次。孟魯司特組除正常致敏、激發(fā)外，用孟魯斯特（10mg/kg）混懸液灌胃，每日一次；正常對照組致敏與激發(fā)均使用生理鹽水。最后一次激發(fā)24小時(shí)后，1％戊巴比妥鈉麻醉動物。動物肺功能檢查（檢測氣道基本阻力和靜脈注射乙酰膽堿后氣道阻力變化）；肺組織行病理切片，HE染色，采用計(jì)算機(jī)圖象分析技術(shù)測定支氣管基底膜周徑（Pbm），總管壁面積（WAt），平滑肌面積（WAm）等反映氣道壁厚度的指標(biāo)；Masson染色觀

4、察氣道壁膠原的表達(dá)變化；ELISA法檢測各組大鼠血清中LTD4含量的變化；免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠氣道壁TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的表達(dá)變化，并應(yīng)用圖像分析軟件測量TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的相對表達(dá)強(qiáng)度。
　　 結(jié)果
　　 1、孟魯司特對哮喘大鼠氣道重塑的影響：哮喘組大鼠肺組織可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤，杯狀細(xì)胞增生，黏液分泌增加和平滑肌細(xì)胞增生，孟魯司特干預(yù)后能明顯減少上述改變。分析比較各組大鼠

5、氣道管壁面積、平滑肌面積結(jié)果顯示：哮喘模型組（94.09±5.62、33.51±4.12）和孟魯司特組（85.78±3.70、26.30±7.09）氣道管壁面積、平滑肌面積顯著大于正常對照組（70.18±7.09、16.86±2.93）（P<0.01），孟魯司特組氣道管壁面積、平滑肌面積明顯小于哮喘模型組（P<0.05）。
　　 2、孟魯司特對哮喘大鼠肺功能的影響：哮喘模型組（1.9804±0.3885）和孟魯司特組（1.540

6、2±0.3524）大鼠氣道基本阻力高于正常對照組（1.1046±0.2085）（P<0.01），孟魯司特組低于哮喘模型組（P<0.05）；經(jīng)靜脈注射乙酰膽堿后哮喘模型組大鼠和孟魯斯特組大鼠氣道阻力變化幅度高于正常對照組，孟魯司特組大鼠氣道阻力低于哮喘模型組。
　　 3、孟魯司特對哮喘大鼠氣道壁膠原沉積的影響：哮喘模型組（0.0477±0.0041）與孟魯斯特組（0.0289±0.0026）膠原表達(dá)量較正常對照組（0.0197±0

7、.0030）明顯增加（P<0.01）；孟魯斯特組的膠原表達(dá)量少于哮喘模型組（P<0.01）。
　　 4、孟魯司特對哮喘大鼠血清LTD4的影響：哮喘模型組（10.7±3.5）和孟魯司特組（9.8±1.6）白三烯水平均比正常對照組（6.1±0.7）顯著升高（P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）；但哮喘模型組與孟魯司特組之間沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　 5、各組大鼠氣道免疫組化TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的圖像

8、半定量分析，以平均光密度為統(tǒng)計(jì)量：
　　 TGF-β1：哮喘模型組TGF-β1蛋白表達(dá)積分（0.3615±0.049）高于正常對照組（0.2325±0.060）（P<0.01），孟魯司特組TGF-β1蛋白表達(dá)積分（0.3109±0.036）高于正常對照組（P<0.01）而低于哮喘模型組（P<0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示：TGF-β1與膠原的表達(dá)變化成正相關(guān)（r=0.8392，P<0.05）。
　　 MMP-9：哮喘模型

9、組MMP-9蛋白表達(dá)積分（0.3710±0.0475）高于正常對照組（0.2228±0.0439）（P<0.01），孟魯司特組MMP-9蛋白表達(dá)積分（0.3129±0.0368）高于正常對照組（P<0.01）而低于哮喘模型組（P<0.05）。
　　 TIMP-1：哮喘模型組TIMP-1蛋白表達(dá)積分（0.4680±0.057）高于正常對照組（0.2359±0.050）（P<0.01），孟魯司特組TIMP-1蛋白表達(dá)積分（0.360

10、4±0.047）高于正常對照組（P<0.01）而低于哮喘模型組（P<0.01）。
　　 MMP-9/TIMP-1：哮喘模型組比值（0.79±0.04）較正常對照組（0.95±0.12）比值減?。≒<0.01）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示：MMP-9/TIMP-1與膠原的表達(dá)變化成負(fù)相關(guān)（r=-0.8963，P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、哮喘模型組氣道TGF-β1、MMP-9和TIMP-1表達(dá)水平明顯高于正常對

11、照組，哮喘模型組MMP-9/TIMP-1明顯低于正常對照組。
　　 2、TGF-β1、MMP-9和TIMP-1聯(lián)合檢測對哮喘氣道重塑診斷有一定的參考價(jià)值，有可能作為一個輔助診斷指標(biāo)。
　　 3、孟魯司特可明顯降低哮喘大鼠氣道TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的表達(dá)水平，并且使MMP-9/TIMP-1比值趨于正常。
　　 4、孟魯司特可能會通過下調(diào)哮喘大鼠TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的表達(dá)水平，糾正M