D2-D3受體激動劑Ropinirole抗多巴胺能細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson’s disease, PD）是常見的中老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要是由于中腦多巴胺能神經(jīng)元（Dopaminergic neuron）進行性變性而致多巴胺(Dopamine，DA)遞質(zhì)水平下降所致。臨床上主要以靜止性震顫，運動遲緩，肌張力增高為特點；伴隨疾病進展，患者最終喪失日常運動能力而帶來極高的致殘率。目前尚無有效治療藥物。臨床資料表明，高選擇性D2/D3受體激動劑羅匹尼羅（Ropinirole）在控制P

2、D癥狀、治療左旋多巴引發(fā)的癥狀波動、運動障礙顯示了良好的療效，能延緩多巴胺轉(zhuǎn)運體（Dopamine transporter, DAT）功能惡化及PD進展。實驗研究顯示，神經(jīng)毒素魚藤酮建立的細胞模型是研究PD中腦DA神經(jīng)元損傷和保護機制的有力工具。絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen activated protein kinase, MAPK）通路和caspase依賴的內(nèi)源性凋亡通路在DA細胞凋亡過程起重要作用。前者家族包括c-Jun N

3、H2-terminal kinase（JNK）、P38 MAP kinase（P38）和extracellular signal regulated kinase（ERK1/2），后者主要由caspase 9, caspase 3和PARP (poly [Aop] ribose polymerase)組成。明確羅匹尼羅是否能具有對抗DA神經(jīng)元凋亡作用，及其作用是通過哪條通路介導(dǎo)，能為此藥物在臨床上的運用提供有益的實驗證據(jù)。 為此

4、，本項研究采用呼吸鏈抑制劑魚藤酮誘導(dǎo)多巴胺能細胞株SH-SY5Y凋亡模型，觀察Ropinirole是否具有抗凋亡作用并探索其抗凋亡機制。研究發(fā)現(xiàn)，SH-SY5Y細胞經(jīng)魚藤酮處理24 h，細胞凋亡比例明顯升高，可達30％-40％。Hoechst33258染色顯示細胞核濃縮的凋亡征象。Ropinirole 100 Μm預(yù)處理2 h能顯著降低魚藤酮介導(dǎo)的細胞凋亡，此抗凋亡作用呈現(xiàn)劑量依賴性。Western blot顯示，SH-SY5Y細胞經(jīng)魚

5、藤酮處理24 h后，內(nèi)源性凋亡通路中關(guān)鍵蛋白cleaved caspase 9, cleaved caspase 3和cleaved PARP表達明顯增高，Ropinirole 100 Μm預(yù)處理2 h則能明顯抑制caspase 9, caspase 3和PARP的剪切。此外，魚藤酮使SH-SY5Y細胞內(nèi)JNK和P38的磷酸化明顯增高，此效應(yīng)在Ropinirole預(yù)處理后減輕；Ropinirole預(yù)處理還使ERK1/2 和Akt磷酸化增