β-,2-腎上腺能受體激動(dòng)劑-拮抗劑對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的調(diào)節(jié).pdf

1、研究β<,2>腎上腺素能受體(ADR β<,2>R)在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)的表達(dá)及hMSCs向成骨細(xì)胞(OB)分化時(shí)ADR β<,2>R激動(dòng)劑／拮抗劑對(duì)成骨指標(biāo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(B,MP<,2>)和核心結(jié)合因子a。(cbf α<,1>)mRNA表達(dá)的影響，從而探討交感神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)成骨代謝影響的機(jī)制。 方法 抽取健康成年人的骨髓，采用密度梯度離心法獲取hMSCs并培養(yǎng)傳至3代。通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)和成骨誘導(dǎo)

2、(OSI)來鑒定hMSCs。用熒光定量PCR檢測hMSCs上ADR β<,2>R mRNA的表達(dá)。隨機(jī)把hMSCs分成A組(ADR β<,2>R激動(dòng)劑組)、B組(ADR β<,2>R拮抗劑組)和C組(對(duì)照組)。在將hMSCs向oB誘導(dǎo)分化過程中按1 μ mol／L、5u mol／L和10μ mol／L的終濃度分別向A組和B組加入沙丁胺醇和ICI-118551。用熒光定量PCR檢測細(xì)胞培養(yǎng)至48h、72h和96h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的成骨指標(biāo)BMP

3、<,2>和cbf α<,1>mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果 1．發(fā)現(xiàn)hMSCs上存在ADRβ<,2>R mRNA的表達(dá)。 2．hMSCs成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)0～48h，與對(duì)照組相比，ADR β<,2>R激動(dòng)劑各濃度組cbfa<,1>mRNA的表達(dá)都減弱；而ADR β<,2>R拮抗劑組都增加，并且濃度為10μ mol＼L組增加的最為明顯。48～96h，各組cbf a<,1>mRNA的表達(dá)都開始下降，并且隨著時(shí)間的延長，各組

4、的表達(dá)趨于相同。 3．在對(duì)照組和ADR β<,2>R激動(dòng)劑組中BMP<,2> mRNA的表達(dá)隨培養(yǎng)時(shí)間延長都是增加的，但ADR β <,2>R激動(dòng)劑各濃度組明顯少于對(duì)照組； O～72h，ADR β<,2>R拮抗劑組中BMP<,2>mRNA表達(dá)也是增加的，并且強(qiáng)于對(duì)照組，且濃度越大增強(qiáng)的越明顯。但到72小時(shí)之后，ADR β<,2>R拮抗劑各濃度組的BMP<,2>mRNA的表達(dá)都開始下降，但仍高于對(duì)照組。 4．a(chǎn)bf a<

5、,1>和BMP<,2>mRNA的表達(dá)與ADR β<,2>R激動(dòng)劑的作用劑量可能無關(guān)；而在ADR β<,2>R拮抗劑組，隨著作用藥物濃度的增加，其表達(dá)也相應(yīng)的增加。 5．在48h和72h時(shí)，ADR β <,2>R拮抗劑各濃度組cbf a<,1>和BMP<,2> mRNA的表達(dá)幾乎都強(qiáng)于對(duì)照組，而ADR β<,2>R激動(dòng)劑組幾乎都低于對(duì)照組，但在96h時(shí)，上述差異不明顯。 結(jié)論 1．hMSCs上存在ADRβ<,2