Neuromedin U2受體的非肽激動劑的初步研究.pdf

1、華東師范大學碩士學位論文NeuromedinU2受體的非肽激動劑的初步研究姓名：房麗燕申請學位級別：碩士專業(yè)：生理學指導教師：胡應和20060501華東師范大學碩士學位論文中文摘要NeuromedinU2受體的非肽激動劑的初步研究摘要NeuromedinU2受體(NMU2R)在調節(jié)攝食和體重方面發(fā)揮著重要作用，因此NMU2R的激動劑可能成為抵制肥胖的一種減肥藥，但目前關于NMU2R的非內源性激動劑的報道很少，并且關于卜琢仉，2R的具體作

2、用機制還未完全清楚。本文利用NMU2R受體細胞株研究了NMU2R受體激動劑的活性，以及利用實時熒光定量PCR的方法檢測了NMU2R參與調節(jié)攝食以及胰島素敏感性方面的相關基因的變化。1NMU2R受體細胞株的建立本文采用PCR技術從人基因組DNA中克隆出NMU2R全長cDNA，然后將其克隆入真核表達載體pcDNA31()中，構建NMU2RpcDNA31真核表達載體。將NMU2R_pcDNA31載體和報告基因質粒共轉染入HEK293細胞中，得

3、到穩(wěn)定細胞株。利用CRE的激活劑ForSkolin和NMU2R的內源性激動劑NMU檢測細胞株的活性，熒光素酶報告基因表達量檢測結果顯示該細胞株對Forskolin和NMU都有較好的響應，呈劑量依賴關系。2NMu2R受體激動劑的活性分析目前我們已經(jīng)篩選出NMU2R的激動劑，經(jīng)過結構分析發(fā)現(xiàn)它們同屬于一大類化合物——黃酮類化合物。因此利用NMU2R穩(wěn)定細胞株在體外檢測這些化合物以及經(jīng)過修飾的化合物的活性，比較其EC50。結果顯示，化合物Mm

4、l7與化合物Zsg3具有較好的活性，其EC50分別是14012肛M和16248“M，而利用該細胞株檢測的NMU2R的內源性配體NMU的EC50為6114uM。3EUK20lO對食欲相關基因表達的影響EUK2010是NMU2R的激動劑，實驗證明它能夠減輕大鼠或小鼠的體重。為了研究在NMu2R在調節(jié)體重和飲食方面的相關分子作用機制，將NMu2R的激動劑EUK20lO灌喂小鼠，實時熒光定量PCR方法檢測其下丘腦以及脂肪組織中與攝食相關的基因表