聯(lián)合應(yīng)用磁性納米四氧化三鐵顆粒和5-溴漢防己甲素對(duì)柔紅霉素誘導(dǎo)的K562-A02細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響.pdf

1、目的:本課題旨在觀察聯(lián)合應(yīng)用磁性納米四氧化三鐵顆粒[MNP（Fe3O4）]和5-溴漢防己甲素（5-BrTet）對(duì)柔紅霉素（DNR）誘導(dǎo)的K562/A02細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響，并測(cè)定Bcl-2，Bax，p53，F(xiàn)as和Caspase-3的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)情況，以探討藥物逆轉(zhuǎn)多藥耐藥（MDR）的可能機(jī)制，為臨床白血病的治療提供一定的理論依據(jù)。 方法: （1）應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分別檢測(cè)各種藥物作用前后K562/A02細(xì)胞和K56

2、2細(xì)胞的凋亡率。 （2）采用普通光學(xué)顯微鏡和DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察藥物作用前后K562/A02細(xì)胞形態(tài)和生化特征。 （3）采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Real time RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（WB）檢測(cè)藥物作用前后Bcl-2，Bax，p53，F(xiàn)as和Caspase-3的mRNA和蛋白水平。 結(jié)果: （1）流式結(jié)果表明：①單用MNP（Fe3O4）或5-BrTet時(shí)K562/A02細(xì)胞的凋亡情

3、況：K562/A02細(xì)胞48h凋亡率為（4.33±0.40）％，10μg/ml MNP（Fe3O4）和0.35μg/ml5-BrTet分別單獨(dú)作用于K562/A02細(xì)胞48h凋亡率分別為（4.60±0.62）％及（4.27±0.81）％；②聯(lián)合MNP（Fe3O4）或5-BrTet和DNR時(shí)K562/A02細(xì)胞的凋亡情況：空白對(duì)照組，1.0μg/mlDNR組，DNR1.0μg/ml+MNP（Fe3O4）10μg/ml組，DNR1.0μg/

4、ml+5-BrTet0.35μg/ml和DNR1.0μg/ml+MNP（Fe3O4）10μg/ml+5-BrTet0.35μg/ml組的48h凋亡率分別為（4.03±0.61）％，（8.30±0.40）％，（15.60±0.76）％，（19.53±0.67）％及（40.20±1.49）％；③聯(lián)合MNP（Fe3O4）或5-BrTet和DNR時(shí)K562細(xì)胞的凋亡情況：空白對(duì)照組，1.0μg/mlDNR組，DNR1.0μg/ml+MNP（Fe

5、3O4）10μg/ml組，DNR1.0μg/ml+5-BrTet0.35μg/ml組和DNR1.0μg/ml+MNP（Fe3O4）10μg/ml+5-BrTet0.35μg/ml組的48h凋亡率分別為（4.33±0.45）％，（51.53±0.71）％，（55.13±1.32）％，（52.60±0.70）％及（55.23±1.33）％。 （2）聯(lián)合小劑量DNR（1.0μg/ml），MNP（Fe3O4）及5-BrTet作用于K56

6、2/A02細(xì)胞48h后，光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞胞體固縮、核固縮、核碎裂及凋亡小體等典型凋亡形態(tài)改變，DNA瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)梯狀條帶；大劑量的化療藥物（20μg/ml的DNR）作用于K562/A02細(xì)胞48h后導(dǎo)致大量細(xì)胞呈現(xiàn)胞體腫大、核破碎、胞膜破裂、內(nèi)容物釋放等壞死改變，DNA電泳呈彌散改變。 （3）當(dāng)MNP（Fe3O4）和5-BrTet聯(lián)合DNR作用于K562/A02細(xì)胞48h后，Bcl-2 mRNA和蛋白水平下調(diào)，Bax，p53

7、，F(xiàn)as和Caspase-3 mRNA和蛋白水平上調(diào)，與凋亡率變化情況呈正相關(guān)。 結(jié)論: （1）MNP（Fe3O4）或5-BrTet單獨(dú)應(yīng)用時(shí)并不能增加K562/A02細(xì)胞凋亡率；MNP（Fe3O4）或5-BrTet聯(lián)合DNR后均能有效促進(jìn)K562/A02細(xì)胞凋亡，三藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)作用更強(qiáng)；5-BrTet聯(lián)合DNR較單用DNR促進(jìn)K562細(xì)胞凋亡的作用無(wú)明顯差異，而MNP（Fe3O4）聯(lián)合DNR或三藥聯(lián)合作用K562細(xì)胞后