攜載柔紅霉素磁性納米四氧化三鐵逆轉K562-n-VCR細胞多藥耐藥的體內研究.pdf

1、目的:本課題旨在研究攜載柔紅霉素（DNR）的磁性納米四氧化三鐵顆粒（MNP-Fe3O4）在裸鼠體內逆轉人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變裸鼠高成瘤性多藥耐藥細胞株K562-n/VCR的效果，并測定Mdr-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3的轉錄與表達水平，以初步探討載藥納米顆粒體內逆轉白血病多藥耐藥的作用機理，為載藥納米顆粒逆轉白血病多藥耐藥的臨床應用提供理論依據。 方法:（1）采用機械吸附法在4℃將0．2g/L DNR溶

2、液與0．116g/L MNP-Fe3O4溶液以1：1比例聚合48h。（2）培養(yǎng)的人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變裸鼠高成瘤性細胞株K562-n及其相應的多藥耐藥株K562-n/VCR，分別接種于裸鼠兩側的腹股溝皮下，建立人白血病移植瘤模型。（3）十天以后，將雙側成瘤裸鼠隨機分為5組，A組給予生理鹽水，B組給予MNP-Fe3O4，C組給予DNR，D組給予攜載DNR的MNP-Fe3O4，E組給予攜載DNR的MNP-Fe3O4，同時在腫瘤表面

3、固定磁場。在實驗開始后的第1、5、9、13、17和21天分別測量腫瘤體積。治療結束后，分離瘤組織秤重，并用蘇木素-伊紅（HE）染色對腫瘤組織和正常器官進行病理切片觀察。用實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（Real-time RT-PCR）以及免疫蛋白印記法（WB）檢測K562-n/VCR腫瘤組織Mdr-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3的轉錄和表達。 結果:（1）K562-n/VCR腫瘤：①治療20天后，A、B、C、D和E五

4、組的腫瘤體積分別為4．8700±2．0694cm3、4．6432±1．5229cm3、4．1657±0．8257cm3、2．2406±0．3401cm3和2．0754±1．6277cm3。②A、B、C、D和E五組的腫瘤重量分別為3．5297±1．4999g、3．4253±1．1218g、3．0012±0．5421g、1．6812±0．1522g和1．5979±0．4673g。③病理結果顯示：A和B組腫瘤細胞生長良好，未見明顯細胞壞死；C

5、組腫瘤細胞可見散在細胞壞死，部分細胞出現核固縮、核碎裂等，D和E組腫瘤組織內可見細胞明顯破碎、壞死、組織的纖維化。④D和E組的Mdr-1的轉錄水平低于A、B和C三組，但是P-gp蛋白表達在五組中無差異。⑤D和E組腫瘤的Bcl-2的轉錄水平和蛋白表達量低于A、B和C三組，D和E組腫瘤的Bax和Caspase-3的轉錄水平和蛋白表達量高于A、B和C三組。（2）K562-n腫瘤：①治療20天后，A、B、C、D和E五組的腫瘤體積分別為2．949

6、5±0．7106cm3、2．3779±0．4802cm3、0．9226±0．5458cm3、0．8473±0．4800cm3和0．7942±0．4665cm3。②A、B、C、D和E五組的腫瘤重量分別為2．0789±0．4472g、1．8912±0．3984g、0．8437±0．4913g、0．8164±0．4291g和0．8195±0．4702g。③病理結果顯示：A和B組腫瘤細胞生長良好，未見明顯細胞壞死；C、D和E組腫瘤組織內可見細胞

7、明顯破碎、壞死、組織的纖維化。 結論:（1）攜載DNR的MNP-Fe3O4可以在體內有效的逆轉K562-n/VCR腫瘤的多藥耐藥。（2）攜載DNR的MNP-Fe3O4可以在體內下調K562-n/VCR腫瘤的Mdr-1的轉錄，但是并不下調P-gp的表達。（3）凋亡相關檢測提示攜載DNR的MNP-Fe3O4在體內通過下調Bcl-2的轉錄與表達，上調Bax的轉錄與表達，激活Caspase-3途徑誘導K562-n/VCR腫瘤的凋亡而增加