漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞株多藥耐藥的機(jī)理研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在探討漢防已甲素(TET)在逆轉(zhuǎn)人慢性粒細(xì)胞白血病急性紅白血病變細(xì)胞株K562及其耐藥細(xì)胞株K562/A02細(xì)胞耐藥與耐藥相關(guān)性可溶性鈣結(jié)合蛋白(sorcin)及其基因、細(xì)胞周期依賴性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P-gp)及其基因之間的關(guān)系,探討藥物的可能機(jī)制,為T(mén)ET的臨床應(yīng)用提供新的理論基礎(chǔ)。 方法：通過(guò)四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法篩選出所需濃度TET,與K562/A02細(xì)胞株孵育培養(yǎng)48/72小時(shí)后,通過(guò)

2、MTT比色法檢測(cè)TET對(duì)DNR細(xì)胞毒性的影響；通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)細(xì)胞sorcin基因表達(dá)的變化,蛋白質(zhì)斑跡法方法檢測(cè)細(xì)胞sorcin蛋白表達(dá)的變化；通過(guò)Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞p21蛋白表達(dá)的變化,通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞多藥耐藥基因mdrl的mRNA表達(dá)的變化,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞P-gp的表達(dá)。 結(jié)果：(1)MTT法篩選結(jié)果:TET單藥48小時(shí)對(duì)K562及K562/A02細(xì)

3、胞株的IC50均大于4mg/L。(2)TET對(duì)DNR細(xì)胞毒性的影響：在所選濃度范圍內(nèi),TET不增強(qiáng)DNR對(duì)K562的細(xì)胞毒作用,可以增強(qiáng)DNR對(duì)K562/A02的細(xì)胞毒作用(48小時(shí)TET濃度為0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L時(shí)DNR的IC50分別為11.34±0.86mg/L,5.72±0.42mg/L,3.68±0.42mg/L和2.56±0.24mg/L,p<0.05;72小時(shí)TET濃度為0mg/L、0.

4、5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L時(shí)DNR的IC50分別為8.01±0.79mg/L,3.91±0.55mg/L,2.65±0.26mg/L和2.00±0.06mg/L,p<0.05)。(3)細(xì)胞sorcin基因表達(dá)的變化:K562/A02細(xì)胞中sorcin基因高表達(dá),48小時(shí)時(shí)隨著TET濃度的增加sorcin基因的表達(dá)不斷變化(TET濃度為0.5mg/L時(shí)增強(qiáng),1.0mg/L、2.0mg/L時(shí)減弱,p<0.05;72小時(shí)時(shí)隨著

5、TET濃度的增加sorcin基因的表達(dá)也不斷變化(TET濃度為1.0mg/L時(shí)增強(qiáng),0.5mg/L、2.0mg/L時(shí)減弱,p<0.05)。(4)細(xì)胞sorcin蛋白表達(dá)的變化:K562細(xì)胞中sorcin蛋白低表達(dá),K562/A02細(xì)胞中sorcin蛋白高表達(dá),48小時(shí)時(shí)隨著TET濃度的增加不斷變化(TET濃度為0.5mg/L時(shí)增強(qiáng),1.0mg/L、2.0mg/L時(shí)減弱,p<0.05;72小時(shí)時(shí)隨著TET濃度的增加sorcin蛋白的表達(dá)也

6、不斷變化(TET濃度為1.0mg/L時(shí)增強(qiáng),0.5mg/L、2.0mg/L時(shí)減弱,p<0.05)。(5)細(xì)胞p21蛋白表達(dá)的變化：在所選濃度范圍內(nèi),p21的表達(dá)隨著TET濃度的增加逐漸增強(qiáng)(p<0.05)。(6)細(xì)胞mdrl基因表達(dá)的變化:K562細(xì)胞中mdrl幾乎不表達(dá),K562/A02細(xì)胞中mdrl基因高表達(dá),隨著TET濃度的增加mdrl基因的表達(dá)逐漸減弱(p<0.05)。(7)細(xì)胞P-gp蛋白的表達(dá)變化:K562細(xì)胞中P-gp表達(dá)