浙貝母堿逆轉(zhuǎn)肺癌A549-DDP細(xì)胞株多藥耐藥及其機(jī)理研究.pdf

1、目的:1.探討“痰邪致病”與肺癌多藥耐藥相關(guān)性的中醫(yī)理論。2.探討肺癌中醫(yī)證候與化療療效的相關(guān)性。3.探討浙貝母堿逆轉(zhuǎn)A549/DDP肺癌細(xì)胞株耐藥的作用及可能的機(jī)理。方法:1.梳理中醫(yī)學(xué)關(guān)于肺癌的古今文獻(xiàn)資料,采用“取象比類(lèi)”的方法將“痰邪致病”與肺癌耐藥特點(diǎn)進(jìn)行類(lèi)比。2.回顧性分析282例肺癌患者中醫(yī)證候類(lèi)型與化療療效的相關(guān)性,作為本論文的臨床工作基礎(chǔ)研究。3.以理論和臨床研究為基礎(chǔ),展開(kāi)實(shí)驗(yàn)研究,以A549/DDP耐藥肺癌細(xì)胞株為

2、研究對(duì)象,以川芎嗪做對(duì)照藥物,采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞耐藥倍數(shù)、浙貝母堿的最佳逆轉(zhuǎn)耐藥濃度及逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù);用流式細(xì)胞儀檢測(cè)耐藥細(xì)胞凋亡率,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)L-RP蛋白表達(dá),RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞ERCC1-mRNA表達(dá)。結(jié)果:1.通過(guò)文獻(xiàn)整理及“取象比類(lèi)”的方法,論文提出“痰邪是肺癌多藥耐藥的重要病因,化痰散結(jié)法是治療肺癌多藥耐藥的基本治法”的假說(shuō)。2.臨床研究顯示:正氣虧虛證型組較氣虛痰濕型組、氣血瘀滯型組和陰虛熱毒型組肺癌對(duì)化療有效率高

3、(64.1％),治療期間患者更少的出現(xiàn)疾病進(jìn)展(19.6%)。正氣虧虛型與氣虛痰濕型兩組相比,氣虛痰濕型肺癌化療有效率低,更多的患者出現(xiàn)進(jìn)展。中位腫瘤進(jìn)展時(shí)間和總生存時(shí)間單純正氣虧虛證型組優(yōu)于其他各組。3.實(shí)驗(yàn)研究顯示:A549/DDP耐藥倍數(shù)為13.08倍,細(xì)胞高度耐藥。空白對(duì)照組、DDP組、川芎嗪實(shí)驗(yàn)組、浙貝母堿實(shí)驗(yàn)組各組隨DDP濃度的增加,藥物對(duì)A549/DDP細(xì)胞的抑制率不斷增加。川芎嗪實(shí)驗(yàn)組逆轉(zhuǎn)倍數(shù)3.62,浙貝母堿實(shí)驗(yàn)組逆轉(zhuǎn)

4、倍數(shù)3.73。流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡發(fā)生率各組分別為2.56±0.44、13.5±1.42、33.82±4.56、38.16±2.25,川芎嗪實(shí)驗(yàn)組和浙貝母堿實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和DDP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。細(xì)胞免疫熒光測(cè)定的結(jié)果顯示,川芎嗪實(shí)驗(yàn)組和浙貝母堿實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組和DDP組的L-RP表達(dá)明顯降低(p＜0.05)。各組ERCC1mRNA表達(dá)分別為0.62±0.04、0.56±0.03、0.36±0.07、0.32±

5、0.08,川芎嗪實(shí)驗(yàn)組和浙貝母堿實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和DDP組比較顯著降低了ERCC1mRNA的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。結(jié)論:1.本論文理論研究部分提出假說(shuō),通過(guò)文獻(xiàn)整理及“取象比類(lèi)”為假說(shuō)提供了理論依據(jù)。理論研究的內(nèi)容豐富了中醫(yī)學(xué)對(duì)肺癌多藥耐藥的認(rèn)識(shí)。2.臨床研究提示正氣虧虛型是晚期肺癌中預(yù)后較好的分型,氣虛痰濕型、氣血瘀滯型和陰虛熱毒型是晚期肺癌中預(yù)后較差的分型,推測(cè)肺癌的發(fā)生、發(fā)展可能遵從先出現(xiàn)正氣虧虛,而后合并出現(xiàn)