重組人血管內(nèi)皮抑素逆轉(zhuǎn)A549-DDP細(xì)胞對順鉑耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：肺癌已經(jīng)成為全世界最常見的惡性腫瘤，在惡性腫瘤相關(guān)死亡原因中占第一位。目前肺癌的治療是以綜合治療為主，化學(xué)治療在肺癌治療中有著重要地位，耐藥性產(chǎn)生是化療失敗的主要原因之一?？朔退幮缘姆椒ㄖ皇鞘褂媚孓D(zhuǎn)劑，在肺癌治療中，DDP是主要的化療藥物，易產(chǎn)生耐藥，影響化療效果。重組人血管內(nèi)皮抑素（恩度Endostar）作為一種血管內(nèi)皮抑制劑，具有靶向明確、毒副作用小、不產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，與化療聯(lián)合可增加化療療效。Endostar化療增效可

2、能與其逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性有關(guān)。本研究主要探討重組人血管內(nèi)皮抑素（恩度Endostar）對DDP耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制，進(jìn)一步探討Endostar化療增效的機(jī)制。 目的：探討重組人血管內(nèi)皮抑素（恩度Endostar）逆轉(zhuǎn)A549/DDP細(xì)胞耐藥的發(fā)生及逆轉(zhuǎn)機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)采用人肺腺癌細(xì)胞株A549及耐藥細(xì)胞株A549/DDP作為研究對象，以DDP與Endostar兩者聯(lián)合及單獨(dú)給藥的方式分別作用于人肺腺癌

3、細(xì)胞株A549及耐藥細(xì)胞株A549/DDP，作用時間72小時，觀察不同給藥方式在同株細(xì)胞之間的不同及不同株細(xì)胞間差別。采用MTT法檢測Endostar對A549/DDP細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用；用流式細(xì)胞儀測定A549/DDP組、DDP組、Endostar聯(lián)合DDP組分別作用于A549/DDP細(xì)胞后的相對熒光強(qiáng)度；RT-PCR法檢測DDP組、Endostar聯(lián)合DDP組、Endostar組、分別作用于A549/DDP細(xì)胞后的耐藥基因的mRN

4、A表達(dá)情況，并且設(shè)立A549細(xì)胞對照組、A549/DDP細(xì)胞對照組，同時也檢測對照組的耐藥基因的mRNA表達(dá)情況，檢測的耐藥基因包括：谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）及肺耐藥蛋白（LRP）。 結(jié)果： 1.DDP對A549細(xì)胞半數(shù)抑制濃度（IC50）為（0.72±0.05）ug/ml，對A549/DDP半數(shù)抑制濃度（IC50）為（11.54±0.64）ug／ml?？梢?，A549/DDP對DDP的

5、耐藥指數(shù)為16。Endostar聯(lián)合DDP對A549/DDP半數(shù)抑制濃度（IC50）為（2.0±0.1）ug／ml。逆轉(zhuǎn)倍數(shù)（RF）為5.77，相對逆轉(zhuǎn)率（RRR%）為88.2%，提示Endostar具有逆轉(zhuǎn)A549/DDP細(xì)胞耐藥的作用。Endostar聯(lián)合DDP對A549細(xì)胞半數(shù)抑制濃度（IC50）約為（0.25±0.06）ug/ml，提示Endostar與DDP在體外有明顯的協(xié)同作用。 2.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示DDP熒光強(qiáng)度

6、：單藥DDP組、A549/DDP對照組、Endostar聯(lián)合DDP組的相對熒光強(qiáng)度分別是：1618±82.31、974±13.45、2958±63.96，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P<0.05，提示Endostar可以增加細(xì)胞內(nèi)的鉑含量，增加治療療效。 3.RT-PCR檢測結(jié)果顯示：A549/DDP細(xì)胞內(nèi)的GST、TOPO-Ⅱ基因的mRNA表達(dá)均較A549細(xì)胞高，DDP聯(lián)合Endostar組處理后的A549/DDP細(xì)胞內(nèi)GST、TOPO-Ⅱ基因

7、的mRNA表達(dá)均有明顯下降，各組比較均P（0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組細(xì)胞中均有LRP的表達(dá)，A549/DDP細(xì)胞中LRP表達(dá)較A549細(xì)胞高，經(jīng)Endostar聯(lián)合DDP處理后，A549/DDP細(xì)胞中的LRP的表達(dá)略下降，各組比較均P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：Endostar能逆轉(zhuǎn)A549/DDP對DDP的耐藥性，Endostar逆轉(zhuǎn)DDP耐藥性的機(jī)制可能是減少A549/DDP細(xì)胞內(nèi)GSH和TOPO-Ⅱ基因的mRNA表