和厚樸酚逆轉(zhuǎn)CNE2-DDP細(xì)胞耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　 探討HNK對(duì)人鼻咽癌多藥耐藥細(xì)胞系CNE2/DDP細(xì)胞多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 [方法]
　　 (1)體外培養(yǎng)CNE2及CNE2/DDP細(xì)胞,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。
　　 (2)MTT法檢測(cè)CNE2、CNE2/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑(DDP)、5氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性,分析其耐藥倍數(shù)。
　　 (3)MTT法檢測(cè)和厚樸酚(Honokiol,HNK)處理前后CN

2、E2/DDP細(xì)胞對(duì)DDP敏感性的變化,分析其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)、相對(duì)逆轉(zhuǎn)率。
　　 (4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DDP對(duì)HNK處理前后CNE2/DDP細(xì)胞凋亡率的影響。
　　 (5)RT-PCR法檢測(cè)CNE2細(xì)胞、HNK處理前后CNE2/DDP細(xì)胞的bcl-2 mRNA表達(dá)水平。
　　 (6)RT-PCR法檢測(cè)CNE2細(xì)胞、HNK處理前后CNE2/DDP細(xì)胞的mdr-1 mRNA及hpmRNA表達(dá)水平。
　　 [結(jié)果]

3、r>　　 (1)CNE2/DDP細(xì)胞的DDP、5-FU耐藥倍數(shù)分別是12.67、24.23倍,確定CNE2/DDP細(xì)胞具有多藥耐藥性。HNK能夠抑制CNE2/DDP細(xì)胞的增殖,并呈濃度依賴性;當(dāng)HNK濃度小于4.0μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖的影響小,48h細(xì)胞存活率大于90％,所以取小于IC10的兩個(gè)劑量2.0μg/ml和4.0μg/ml作為逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)劑量。
　　 (2)無毒劑量2.0μg/ml和4.0μg/ml的FINK處理CNE

4、2/DDP細(xì)胞后,CNE2/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的IC50值降低,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為3.54、5.31,相對(duì)逆轉(zhuǎn)率分別為77.95%、88.15%,逆轉(zhuǎn)作用呈劑量相關(guān)性;提示HNK能夠逆轉(zhuǎn)CNE2/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的耐藥性,且逆轉(zhuǎn)作用與濃度具有一定效應(yīng)關(guān)系。取最小濃度的HNK即2.0μg/na進(jìn)行下一步逆轉(zhuǎn)機(jī)制研究。
　　 (3)HNK2.0μg/ml+DDP3.0μmol/L處理CNE2/DDP細(xì)胞48h,細(xì)胞凋亡率明顯高于DDP

5、3.0μmol/L、HNK2.0μg/ml分別處理CNE2/DDP細(xì)胞組,差異顯著(P＜0.01),HNK2.0μg/ml處理的CNE2/DDP細(xì)胞組與CNE2細(xì)胞組的凋亡率比較,無明顯差異(P＞0.05)。
　　 (4)以bcl-2/β-actin cDNA灰度比值進(jìn)行bcl-2 mRNA水平的相對(duì)半定量分析,CNE2/DDP細(xì)胞bcl-2 mRNA水平較CNE2細(xì)胞增高(P＜0.01):HNK能夠降低CNE2/DDP細(xì)胞bc

6、l-2 mRNA(P＜0.01)。
　　 (5)以mdr1/β-actin、lrp/β-actin灰度比值進(jìn)行mdrl mRNA、lrp mRNA水平的相對(duì)半定量分析,CNE2/DDP細(xì)胞mdrl mRNA、lrp mRNA水平較CNE2細(xì)胞增高(兩組P＜0.01);HNK能夠降低CNE2/DDP細(xì)胞mdr-1 mRNA、hpmRNA水平(兩組P＜0.01).
　　 [結(jié)論]
　　 (1)HNK可以部分逆轉(zhuǎn)CNE