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文檔簡介
1、研究目的:
初步探考黃芪甲苷逆轉(zhuǎn)人胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP多藥耐藥性的作用以及其可能機(jī)制。
研究方法:
1.MTT法鑒定SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性;
2.MTT法測(cè)定黃芪甲苷和維拉帕米的細(xì)胞毒性,選取兩種藥物的無毒濃度進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。
3.以逆轉(zhuǎn)劑維拉帕米作為陽性對(duì)照,MTT法測(cè)定無毒濃度的黃芪甲苷逆轉(zhuǎn)SGC7901/DDP細(xì)胞多藥耐藥性的作用;
4
2、.RT-PCR法檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)MDR1基因表達(dá)的影響;
5.Western bolt法觀察黃芪甲苷對(duì)MDR1基因編碼產(chǎn)物P-gp表達(dá)的影響,推測(cè)黃芪甲苷逆轉(zhuǎn)耐藥的可能機(jī)制。
研究結(jié)果:
1.SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性明顯弱于SGC7901細(xì)胞,相對(duì)耐藥指數(shù)為3.26,說明該細(xì)胞具有耐藥性。
2.黃芪甲苷能抑制SGC7901/DDP耐藥細(xì)胞的增殖,并呈時(shí)效及量效關(guān)系,維拉帕米對(duì)耐藥細(xì)胞
3、有強(qiáng)大的增殖抑制作用,且累積毒性明顯。0.02、0.04、0.08mg/mL黃芪甲苷及10μg/mL維拉帕米對(duì)SGC7901/DDP細(xì)胞的抑制率均不超過10%,可作為無毒濃度。
3.黃芪甲苷能增加SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性而實(shí)現(xiàn)多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn),并有濃度依賴性,0.02、0.04、0.08mg/mL黃芪甲苷作用24h后,細(xì)胞抑制率分別為11.07±1.09、16.29±1.32和24.63±1.68,均高于對(duì)照組
4、的8.97±1.07,相對(duì)逆轉(zhuǎn)倍數(shù)依次為1.23、1.82和2.75,10μg/mL維拉帕米的相對(duì)逆轉(zhuǎn)指數(shù)為4.67。
4.RT-PCR結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度的黃芪甲苷處理后的SGC7901/DDP細(xì)胞MDR1mRNA水平均有所下降。
5.Western bolt結(jié)果顯示隨著黃芪甲苷濃度增加,P-gp相對(duì)表達(dá)量逐漸下降,0.08mg/ml黃芪甲苷能明顯下調(diào)P-gp的表達(dá)水平。
研究結(jié)論:
本實(shí)驗(yàn)證明了
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