SKI-Ⅱ對SGC7901-DDP逆轉耐藥作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討神經鞘氨醇激酶抑制劑SKI-Ⅱ(Sphingosine kinase inhibitorⅡ，SKI-Ⅱ)逆轉SGC7901/DDP細胞對DDP的耐藥作用及其機制。
　　方法：人胃癌順鉑耐藥細胞SGC7901/DDP分別進行體外培養(yǎng)實驗(SKI-Ⅱ(umol/L)+DDP(mg/L)(0+0；0+2.5；1.25+0；1.25+2.5；5+0；5+2.5:10+0；10+2.5))及在無菌條件下接種于4周齡的BALB/C裸

2、鼠皮下建立移植瘤模型進行實驗(對照組、DDP組(2.5 mg/kg)、SKI-Ⅱ組(0.3mg/kg)、DDP+SKI-Ⅱ(2.5mg/kg+0.3mg/kg))：1.四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測各組細胞48h體外增殖情況并計算其逆轉倍數(shù)；2.免疫細胞化學檢測各組細胞及腫瘤組織中P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK的蛋白表達情況；3.免疫印跡法檢測各組細胞及腫瘤組織中P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK的蛋白表達水平；4.

3、比色法檢測細胞內及腫瘤組織內GSH含量及細胞內GST活力；5.RT-PCR法檢測細胞中MRP1及GST mRNA基因表達情況。
　　結果：1.MTT結果顯示：各組藥物作用于SGC7901/DDP細胞48h后，測定SKI-Ⅱ對SGC7901/DDP細胞的逆轉倍數(shù)為1.615。2.所有接種人胃癌細胞系SGC7901/DDP的裸鼠均成瘤，稱量裸鼠腫瘤重量，聯(lián)合用藥組腫瘤重量明顯較對照及單獨用藥組減輕；3.免疫細胞化學染色及Western

4、 blot結果顯示：與對照組相比，DDP單用組P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK蛋白表達無明顯差異(P>0.05)；一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合DDP組P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK蛋白表達較對照組減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組抑制作用強于單獨用藥組(P<0.05)。4.比色法結果顯示：與對照組相比，DDP單用組細胞內及腫瘤組織內GSH、GST含量無明顯差異(P>0.05)，而一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合

5、DDP組表達減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組抑制作用強于單獨用藥組(P<0.05)。5.RT-PCR法結果顯示：各用藥組作用48小時后，DDP組細胞內GST及MRP1 mRNA基因表達情況與對照組相比無明顯差異(P>0.05)，一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合DDP組與陰性對照組相比細胞內GST及MRP1 mRNA基因表達減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組比單獨用藥組表達亦減少(P<0.05)。
　　結論：在本實驗條件下得出以下