粉防已堿對(duì)胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901-VCR多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)機(jī)制研究.pdf

1、目的:胃癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,在我國(guó)其死亡率居惡性腫瘤之首?；熥鳛槟[瘤術(shù)后最有效的輔助治療手段,在防治腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移方面有著舉足輕重的作用。雖然目前胃癌的化療方案不斷完善,但部分胃癌患者對(duì)化療的療效并不理想,其中多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導(dǎo)致化療失敗的根本所在。隨著現(xiàn)代制藥技術(shù)的發(fā)展,P-糖蛋白抑制劑對(duì)腫瘤耐藥性逆轉(zhuǎn)受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注,呈現(xiàn)出良好的前景。粉防己堿(tetrandrine

2、,Tet)是從中草藥粉防己的根塊中提取的雙芐基異喹啉生物堿,具有逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)作用。研究表明,粉防己堿具有較強(qiáng)的體內(nèi)外逆轉(zhuǎn)耐藥癌細(xì)胞活性,有可能用于臨床上耐藥胃癌的治療。奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類(lèi)抗腫瘤藥,已逐漸作為治療進(jìn)展期胃癌的主要藥物,且顯示出良好的應(yīng)用前景。目前P-gp

3、蛋白抑制劑粉防己堿逆轉(zhuǎn)胃癌的MDR及其與奧沙利鉑聯(lián)合應(yīng)用是否增加耐藥胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性的相關(guān)研究較少。
　　 本試驗(yàn)以胃癌細(xì)胞株SGC7901及胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR為研究對(duì)象,使用粉防己堿、L-OHP進(jìn)行干預(yù),應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)及MTT法,觀察、檢測(cè)粉防己堿、L-OHP對(duì)細(xì)胞株SGC7901、SGC7901/VCR及MDR相關(guān)因子(P-gp、Survivin、GST-π

4、)表達(dá)影響及對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和抑制率影響。探討粉防己堿對(duì)胃癌細(xì)胞MDR逆轉(zhuǎn)機(jī)制及其聯(lián)合L-OHP有效治療胃癌并減少耐藥性提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)在胃癌細(xì)胞株SGC7901及耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR培養(yǎng)的基礎(chǔ)上進(jìn)行研究,方法如下:
　　 1.1應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察:SGC7901細(xì)胞組、SGC7901/VCR組、粉防己堿干預(yù)SGC7901/NCR組及粉防己堿聯(lián)合L-OHP干預(yù)SGC7901/VCR細(xì)胞

5、組的形態(tài)變化。
　　 1.2應(yīng)用MTT法檢測(cè)在490nm波長(zhǎng)處A值,分別計(jì)算不同濃度的L-OHP在24h,48h,72h對(duì)SGC7901細(xì)胞組、SGC7901/VCR組的體外殺傷活性,應(yīng)用MTT測(cè)定粉防己堿體無(wú)明顯細(xì)胞毒劑量(IC1010％inhibitingconcentration,10％抑制率)及此劑量聯(lián)合L-OHP對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞48h的體外殺傷活性。
　　 1.3細(xì)胞免疫化學(xué)形態(tài)觀察P-gP、Sur

6、vivin、GST-π在SGC7901組、SGC7901/VCR組、及粉防己堿作用SGC7901/VCR細(xì)胞組48小時(shí)后染色變化。
　　 1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-gP、Survivin、GST-π表達(dá)在SGC7901組、SGC7901/VCR組、及粉防己堿作用SGC7901/VCR細(xì)胞組48小時(shí)后蛋白表達(dá)量的變化。
　　 2統(tǒng)計(jì)方法
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異具有顯著性。

7、
　　 結(jié)論:
　　 1 SGC7901/VCR細(xì)胞與SGC7901細(xì)胞均對(duì)L-OHP有多藥耐藥特性,SGC7901/VCR(IC:50:42.03μg/ml)比SGC7901(IC:50:6.58μg/ml)的耐藥性更強(qiáng)。
　　 2粉防已堿在無(wú)明顯細(xì)胞毒劑量(1.0μg/ml)下作用于SGC7901/VCR細(xì)胞48小時(shí)后SGC7901/VCR細(xì)胞的自然凋亡率由4.80％升高到6.55％.與自然凋亡率相比差異不明

8、顯。提示1.0μg/ml粉防已堿在此劑量下無(wú)明顯細(xì)胞毒作用,不顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 3 L-OHP對(duì)SGC7901細(xì)胞和SGC7901/VCR細(xì)胞的體外殺傷活性在72h最強(qiáng)。且殺傷活性隨L-OHP濃度的增加而增強(qiáng),SGC7901/VCR對(duì)L-OHP的耐藥倍數(shù)在48小時(shí)最大,SGC7901/VCR對(duì)L-OHP的耐受性較親代敏感株SGC7901增加了6.39倍,說(shuō)明SGC790l/VCR對(duì)L-OHP耐藥性強(qiáng)。
　　 4粉

9、防已堿在無(wú)明顯細(xì)胞毒劑量(1.0μg/ml)聯(lián)合L-OHP可明顯降低化療藥物的劑量,有提高化療效果的作用。其作用機(jī)制與粉防已堿逆轉(zhuǎn)胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞的多藥耐藥有關(guān)。
　　 5粉防已堿在無(wú)明顯細(xì)胞毒劑量(1.0μg/ml)有明顯逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞多藥耐藥的作用,其作用機(jī)制與其抑制P-gp,Survivin的表達(dá)有關(guān),與GST-π無(wú)明顯關(guān)系。
　　 6粉防己堿有較好的體外逆轉(zhuǎn)MDR作用,且無(wú)明顯細(xì)胞毒