SKI-KK聯(lián)合順鉑對人胃癌細(xì)胞SGC7901體外生長作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 1.研究鞘氨醇激酶(Sphingosine kinase,SphK)抑制劑SKI-Ⅱ單用以及和順鉑(Cisplatin,DDP)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對人胃癌細(xì)胞株SGC7901的生長抑制作用;
　　 2.探討單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用SKI-Ⅱ和DDP在抑制腫瘤細(xì)胞生長中的作用機(jī)制,從而為胃癌的治療提供新的理論基礎(chǔ)。
　　 方法:人胃癌細(xì)胞SGC7901常規(guī)培養(yǎng)于含10％小牛血清、青霉素-鏈霉素溶液(100X)的RPMI

2、1640培養(yǎng)液中,在37℃、5％CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h、48h、72h。實(shí)驗(yàn)分陰性對照組、SKI-Ⅱ組(0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)、DDP2.5mg/L組、聯(lián)合用藥組(DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ2.5μmol/L、DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ5μmol/L、DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ10μmol/L)。1.四甲基偶氮唑

3、藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞體外增殖:2.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的變化;3.HE染色,光鏡下觀察胃癌SGC7901細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;4.電鏡下觀察胃癌SGC7901細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;5.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測用藥前后NF-κB、VEGF、Bc1-2、Bax、P27、Sphk1在SGC7901細(xì)胞中的表達(dá)情況;6.Western blot檢測用藥前后NF-κB、VEGF、Bcl-2、Bax、P27、Sphk1蛋白在SGC7901細(xì)胞中的表

4、達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用SKI-Ⅱ和DDP對胃癌細(xì)胞SGC7901增殖影響:單藥及聯(lián)合用藥分別作用24h、48h、72h后,細(xì)胞增殖受到顯著抑制,聯(lián)合用藥組較單藥組作用明顯,與陰性對照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);其中72h抑制作用最為明顯,DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ10μmol/L組的抑制率可達(dá)72.19％。金正均法顯示:兩藥聯(lián)用對SGC7901細(xì)胞的增殖抑制具有協(xié)同作用。

5、r>　　 2.流式細(xì)胞術(shù)分析顯示:SKI-Ⅱ單用及聯(lián)合DDP作用48h后,SKI-Ⅱ5μmol/L組、SKI-Ⅱ10μmol/L組、DDP2.5mg/L組、DDP2.5mg/L+Ski-Ⅱ5μmol/L組及DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ10μmol/L組處于G0/G1期細(xì)胞增多,聯(lián)合用藥組比SKI-Ⅱ組作用明顯(P＜0.05)。SKI-Ⅱ5μmol/L組、SKI-Ⅱ10μmol/L組、DDP2.5mg/L組、DDP2.5mg/L+S

6、KI-Ⅱ5μmol/L組和DDP2.5mg/L+SKI-Ⅱ10μmol/L組細(xì)胞凋亡率分別為40.39％±1.06％、45.58％±0.75％、47.27％±1.13％、53.64％±1.11％和66.98％±2.32％,與陰性對照組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.光鏡下觀察到單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用SKI-Ⅱ和DDP作用于胃癌SGC7901細(xì)胞24h、48h、72h后,細(xì)胞體積變小,形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞皺縮,核固縮,胞漿空

7、泡等凋亡形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。
　　 4.電鏡下觀察到SKI-Ⅱ10μmol/L作用SGC7901細(xì)胞48后出現(xiàn)凋亡小體等形態(tài)學(xué)改變。
　　 5.免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示:SKI-Ⅱ單用及聯(lián)合DDP作用48h后,SGC7901細(xì)胞中Bax、P27陽性表達(dá)率增加,NF-κB、Sphk1、VEGF、Bcl-2陽性表達(dá)率減少。Pearson相關(guān)性分析顯示:Sphk1與NF-κB、VEGF的表達(dá)分別呈正相關(guān),與P27的表達(dá)呈負(fù)相關(guān);NF-

8、κB和Bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)性。
　　 6.SKI-Ⅱ單用及聯(lián)合DDP作用48h后,Western blot結(jié)果顯示:Bax、P27蛋白的表達(dá)上調(diào),而NF-κB、Sphkl、VEGF、Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào),聯(lián)合用藥組較單藥組作用明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1.單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用SKI-Ⅱ和DDP可抑制SGC7901細(xì)胞增殖,兩藥具有協(xié)同抗腫瘤作用。
　　 2.單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用SKI-Ⅱ和DDP可以下調(diào)VE