干細(xì)胞標(biāo)志蛋白ABCG2表達(dá)及其耐藥性逆轉(zhuǎn)的初探.pdf

1、第一部分：干細(xì)胞標(biāo)志物：ABCG2在膠質(zhì)瘤組織芯片中表達(dá)分析 目的：三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體成員ABCG2(ATP-binding cassette superfamily Gmember 2)是源于造血干細(xì)胞的標(biāo)志物之一，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況還不清楚。本文檢測(cè)在不同惡性程度的人膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本、裸小鼠移植瘤標(biāo)本、體外細(xì)胞系球體和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球體等組織芯片中的表達(dá)情況和分析其意義。 方法：制作布有不

2、同惡性程度的人膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本、裸小鼠移植瘤標(biāo)本、體外細(xì)胞系球體和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球體等組織芯片，用免疫組化方法檢測(cè)ABCG2在組織芯片中的表達(dá)情況。 結(jié)果：在71例人膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中ABCG2的陽性率為26.8％，其中Ⅰ級(jí)11.1％，Ⅱ級(jí)8％，Ⅲ級(jí)43.5％，Ⅳ級(jí)42.9％；Ⅰ-Ⅱ級(jí)與Ⅲ-Ⅳ級(jí)比差異非常顯著(X<'2>=10.710，P=0.001)，在神經(jīng)干細(xì)胞、裸小鼠移植瘤、腦腫瘤干細(xì)胞球體表達(dá)率為100％。在多種正常組織亦有不

3、同程度的表達(dá)。在膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本中ABCG2陽性細(xì)胞呈親血管分布。 結(jié)論：作為造血干細(xì)胞標(biāo)志物之一的ABCG2在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞、惡性程度高的膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本和移植瘤組織亦高表達(dá)，并且呈親血管分布，可作為膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中血管形成的相關(guān)分子作進(jìn)一步研究。 第二部分：腦腫瘤干細(xì)胞耐藥及其逆轉(zhuǎn)藥物尼卡地平的體外研究 目的：從人腦膠質(zhì)瘤組織中分離、培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，并進(jìn)一步研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的耐藥性。 方法：1、采集人

4、腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本，原代培養(yǎng)形成腫瘤球，經(jīng)免疫磁珠分離獲取CD133<'+>細(xì)胞，繼續(xù)傳代培養(yǎng)。2、RT-PCR檢測(cè)CD133<'+>細(xì)胞中ABCG2的表達(dá)量。3、MTT法研究ABCG2抑制劑一尼卡地平在逆轉(zhuǎn)干細(xì)胞耐藥方面所起的作用。4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率。 結(jié)果： 1、用CD133<'+>免疫磁珠的方法從人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中分離腫瘤干細(xì)胞，這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)期維持呈球形生長(zhǎng)，在適合的環(huán)境中隨時(shí)能自我更新和增殖。

5、 2、在CD133<'+>細(xì)胞中高表達(dá)ABCG2。 3、ABCG2抑制劑尼卡地平能夠有效的逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的米托蒽醌(MX)耐藥性。 4、ABCG2抑制劑尼卡地平與MX合用能夠顯著提高膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的凋亡率。 結(jié)論：CD133磁珠分離膠質(zhì)瘤干細(xì)胞是行之有效的方法，這些細(xì)胞在體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代，可為進(jìn)一步研究膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞提供有用的材料。ABCG2抑制劑能夠有效的逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的耐藥性，有望成為一種新的腦腫