版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:本課題旨在研究聯(lián)合應(yīng)用葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑D,L-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)和漢防己甲素(tetrandrine,Tet)逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞柔紅霉素(daunorubicin,DNR)耐藥,并測定葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)和多藥耐藥基因1(multidrug resist
2、ance genel,mdrl)的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)情況,以探討藥物逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)的可能機(jī)制,為臨床白血病的治療提供一定的理論依據(jù)。
方法:(1)采用甲基四唑藍(lán)法(MTT)檢測PDMP、DNR、PDMP+DNR、Tet+DNR、DNR+PDMP+Tet分別作用于K562/A02細(xì)胞和K562細(xì)胞48小時(shí)后對(duì)細(xì)胞增殖的影響,計(jì)算出其半數(shù)抑制量(the half maximal inh
3、ibitory concentration,IC50)和逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(foldreversal,F(xiàn)R);(2)采用流式細(xì)胞儀(flow cytometry,F(xiàn)CM)檢測PDMP、Tet、PDMP+Tet分別與0.51μg/ml DNR聯(lián)用對(duì)K562/A02細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞內(nèi)DNR濃度的影響;(3)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)測定PDMP
4、、Tet及兩藥聯(lián)合作用于細(xì)胞48小時(shí)后,mdrl mRNA、GCS mRNA表達(dá)變化。(4)采用Western blot測定PDMP、Tet及兩藥聯(lián)合作用于細(xì)胞48小時(shí)后,P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、GCS水平變化。
結(jié)果:(1)PDMP≤20μmol/l對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞株無明顯生長抑制作用(細(xì)胞增殖抑制率<10%),選擇20μmol/l PDMP作為逆轉(zhuǎn)劑濃度;(2)20μmol
5、/l PDMP或1μmol/lTet能增加K562/A02細(xì)胞對(duì)DNR的敏感性,兩種逆轉(zhuǎn)劑聯(lián)用時(shí)效果更明顯。DNR對(duì)K562和K562/A02細(xì)胞的IC50分別為(0.234±0.02)μg/ml和(7.064±0.53)μg/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);DNR分別聯(lián)合PDMP或Tet,以及三藥聯(lián)合作用K562/A02細(xì)胞48小時(shí)后,對(duì)K562/A02的IC50分別為(2.924±0.24)μg/ml、(1.53±0.17)
6、μg/ml和(0.69±0.03)μg/ml,F(xiàn)R分別為2.42、4.61和10.23倍;但PDMP或Tet聯(lián)合DNR以及三藥聯(lián)用對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響與未加逆轉(zhuǎn)劑組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)(IC50分別為(0.25±0.02),(0.22±0.01)和(0.21±0.01)μg/ml)。(3)FCM檢測顯示①對(duì)照組K562/A02細(xì)胞48小時(shí)凋亡率為(2.11±0.35)%;0.5μg/ml DNR單獨(dú)作用于K562/
7、A02細(xì)胞凋亡率為(5.43±0.70)%;DNR分別聯(lián)合20μmol/l PDMP和1μmol/l Tet,以及三藥聯(lián)合時(shí),K562/A02細(xì)胞凋亡率分別為(18.06±1.46)%、(21.93±1.98)%和(42.77±2.32)%;②0.5μg/ml DNR單獨(dú)作用于K562/A02細(xì)胞48小時(shí)后,細(xì)胞內(nèi)DNR平均熒光強(qiáng)度為1554.67±91.09,DNR分別聯(lián)合20μmol/l PDMP、1μmol/l Tet及三藥聯(lián)合處
8、理K562/A02細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)DNR平均熒光強(qiáng)度分別為1975.33±111.54、2069.67±118.29和4435.33±151.13,不同處理組細(xì)胞內(nèi)DNR濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。(3)RT-PCR和Western blot檢測顯示①K562細(xì)胞mdrl和GCS基因在mRNA和蛋白水平呈低表達(dá),兩種基因均在K562/A02細(xì)胞呈高表達(dá);20μmol/l PDMP能下調(diào)K562/A02細(xì)胞內(nèi)GCS基因的表達(dá),T
9、et能下調(diào)K562/A02細(xì)胞內(nèi)mdrl基因的表達(dá),聯(lián)合用藥對(duì)兩種基因的表達(dá)下調(diào)效果更明顯(p<0.05);②PDMP能抑制mdrl基因的表達(dá)而Tet也能下調(diào)GCSmRNA和蛋白含量。
結(jié)論:(1)20μmol/l及以下濃度的PDMP對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞株無明顯細(xì)胞毒性;(2)PDMP和Tet均能提高K562/A02細(xì)胞對(duì)DNR的敏感性,增加細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞內(nèi)藥物濃度,當(dāng)兩藥聯(lián)合時(shí)效果更明顯;(3)PDMP能下
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 5-溴漢防己甲素與漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥性的比較研究.pdf
- 酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥作用機(jī)制的研究.pdf
- 聯(lián)合應(yīng)用酪氨酸激酶抑制劑和5-溴漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥性的初步研究.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶小干擾RNA逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥的研究.pdf
- 漢防己甲素聯(lián)合托瑞米芬逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf
- 漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞株多藥耐藥的機(jī)理研究.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf
- 環(huán)孢菌素A聯(lián)合雌激素受體抑制劑逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf
- 應(yīng)用磁性納米Fe-,3-O-,4-顆粒和漢防己甲素協(xié)同逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性的研究.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶對(duì)白血病耐藥細(xì)胞Bcl-2表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf
- 葡萄糖基神經(jīng)酰胺合成酶參與胰腺癌細(xì)胞多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 聯(lián)合抑制sorcin和mdr1基因逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞株多藥耐藥性.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶在人白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其與多藥耐藥的關(guān)系.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(GCS)在大腸癌組織中的表達(dá)與意義.pdf
- 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶基因在多藥耐藥腫瘤細(xì)胞株K562-AO2中的表達(dá)及其與白血病多藥耐藥的關(guān)系.pdf
- DATS逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞耐藥的機(jī)制研究.pdf
- 納米載體裝載藤黃酸對(duì)逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥性的機(jī)制研究.pdf
- 白血病耐藥細(xì)胞中葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶經(jīng)ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)P-gp表達(dá)的影響.pdf
- NF-κB抑制劑PDTC逆轉(zhuǎn)K562-AO-,2-細(xì)胞耐藥性及其機(jī)制的研究.pdf
- NF-κB介導(dǎo)白血病多藥耐藥細(xì)胞中葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶對(duì)P-糖蛋白的調(diào)節(jié)作用.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論