NF-κB介導(dǎo)白血病多藥耐藥細(xì)胞中葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶對P-糖蛋白的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：探討在白血病耐藥細(xì)胞K562/A02中核因子κB（nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB）是否參與葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）對P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的調(diào)節(jié)作用，及研究NF-κB與ERK（extracelluar signal-regulated kinase,ERK）在該調(diào)節(jié)作用信號通路中的相互關(guān)系。<

2、br>　　方法：使用特異性的GCS小干擾RNA（GCS small interfering RNA,GCSsiRNA）抑制GCS基因后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測靶基因抑制率以及對多藥耐藥蛋白1（multidrug resistance protein1,MDR1）mRNA表達(dá)水平的影響；同時(shí)應(yīng)用Western印跡檢測各種蛋白的表達(dá)情況。使用NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbama

3、te,PDTC）抑制NF-κB后，應(yīng)用Western印跡檢測P-gp的表達(dá)情況。采用U0126抑制磷酸化ERK（phosphorylated-ERK，P-ERK）后，Western印跡檢測細(xì)胞核內(nèi)以及總的NF-κB p65和P-gp的表達(dá)。
　　結(jié)果：GCSsiRNA轉(zhuǎn)染48h后，GCSmRNA的表達(dá)被抑制，抑制率為62%（51%-73%），同時(shí)下調(diào)MDR1 mRNA的表達(dá)，抑制率為52%（43%-61%），與陰性干擾對照組比較，

4、均具有顯著性差異（P＜0.05）；GCSsiRNA轉(zhuǎn)染72h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65及P-ERK的表達(dá)水平均明顯下調(diào)（P＜0.05），同時(shí)對P-gp的表達(dá)亦出現(xiàn)顯著的抑制作用（P＜0.05）。此外實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示：
　?。?）與對照組比較，80μmol/L NF-κB的抑制劑PDTC處理K562/A02細(xì)胞24h后及20μmol/L的PDTC處理48h后，對P-gp皆有明顯的抑制作用（P＜0.05）；
　?。?）2