細胞間P-糖蛋白轉(zhuǎn)移介導(dǎo)膀胱癌BIU-87細胞形成穩(wěn)定多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：探討細胞間P-糖蛋白轉(zhuǎn)移現(xiàn)象在形成并維持膀胱癌BIU-87細胞多藥耐藥中的作用及機制。
　　方法：用Transwell共培養(yǎng)膀胱癌耐藥株細胞BIU-87/ADM與敏感株細胞BIU-87，在共聚焦顯微鏡下觀察共培養(yǎng)至24h、48h、72h、96h Transwell下室BIU-87細胞（即獲得性耐藥細胞AqMDR）P-糖蛋白含量，細胞計數(shù)法繪制BIU-87/AD M、BIU-87、共培養(yǎng)至96h AqMDR三種在加與不加1μg

2、/ml阿霉素（adriamycin,ADM）培養(yǎng)液中的生長曲線并比較其倍增時間，分離出共培養(yǎng)至96h AqMDR繼續(xù)分2組傳代培養(yǎng)，一組培養(yǎng)基中加入1μg/ml阿霉素，另一組不加。分別運用CCK-8、Western Blot、RT-PCR方法、流式細胞儀檢測0、4、8、16、20代及第20代凍存1個月后復(fù)蘇的AqMDR的耐藥指數(shù)、P-gp表達量、MDR1 mRNA表達水平及細胞內(nèi)羅丹明-123熒光強度。
　　結(jié)果：共聚焦顯微鏡結(jié)果

3、顯示P-糖蛋白轉(zhuǎn)移量隨著共培養(yǎng)時間延長逐漸增多。細胞生長曲線提示：在不加ADM組，BIU-87倍增時間（25.30+0.04h）較BIU-87/ADM（31.58+0.37h）短（P<0.001），AqMDR介于兩者之間（28.39+0.33h，P<0.001）；在加入1μg/ml ADM組，BIU-87培養(yǎng)5天后全部死亡，而AqMDR與BIU-87/ADM細胞生長并不受限制。CCK-8、Western Blot、RT-PCR及羅丹明-

4、123外排實驗證實：AqMDR細胞隨著傳代增加，在不加阿霉素組，耐藥指數(shù)和P-gp表達量逐漸下降，細胞內(nèi)羅丹明-123熒光強度逐漸升高，最終回到敏感株BIU-87水平，MDR1 mRNA的表達水平未見明顯改變。在加阿霉素組，耐藥指數(shù)和P-gp表達量略呈增高趨勢，細胞內(nèi)羅丹明-123熒光強度略呈下降趨勢，MDR1 mRNA的表達水平逐漸增高到耐藥株細胞BIU-87/ADM水平。
　　結(jié)論：細胞間P-糖蛋白轉(zhuǎn)移量隨著耐藥株與敏感株共培