pH敏感羧甲基殼聚糖-柔紅霉素納米載藥系統(tǒng)的構(gòu)建與評價.pdf

1、柔紅霉素（Daunorubicin，DNR）是一種蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，被廣泛用于癌癥治療，但水溶性差、毒副作用嚴重等缺陷極大限制其臨床應(yīng)用。本課題采用羧甲基殼聚糖（Carboxymethyl Chitosan，CMCS）為大分子載體，通過酸可降解的腙鍵連接DNR與CMCS，制備了兩親性高分子前藥CMCS-hyd-DNR。該前藥于水介質(zhì)中發(fā)生自組裝形成具有pH敏感性的納米顆粒。主要工作與結(jié)論如下：
　?。?）采用三步合成反應(yīng)制備了高

2、分子前藥，首先在碳化二亞胺催化作用下使甘氨酸甲酯分子上的-NH2與CMCS分子上的-COOH發(fā)生酰胺反應(yīng)進行偶聯(lián)，然后將水合肼與上步反應(yīng)產(chǎn)物的酯基發(fā)生親核取代反應(yīng)引入聯(lián)氨基團，最后聯(lián)氨基團與DNR分子上羰基結(jié)合，形成腙鍵，得到CMCS-hyd-DNR前藥。采用傅里葉紅外光譜儀（FT-IR）、核磁共振波譜儀（1H-NMR）對結(jié)構(gòu)進行表征，表明所有中間產(chǎn)物及目標產(chǎn)物均被成功合成；采用紫外分光光度計（UV）測定高分子前藥中DNR的百分含量，考

3、察CMCS分子量對DNR含量的影響，發(fā)現(xiàn)隨著CMCS分子量的增大（7.0×104-7.4×105），DNR的百分含量在不斷降低（12.45-5.89％）。
　?。?）在水介質(zhì)中，兩親性高分子前藥CMCS-hyd-DNR通過自組裝形成納米顆粒，該納米粒為規(guī)則的球形，不僅具有良好的分散度，并且納米粒表面帶有負電荷；隨著DNR含量的減少，納米粒粒徑不斷增大，為104-216nm；將一定濃度的納米粒溶液置于模擬生理環(huán)境中孵育一段時間，發(fā)現(xiàn)

4、粒徑以及粒徑分布隨著時間的變化并不明顯，表明該納米載藥系統(tǒng)具有良好的血液循環(huán)穩(wěn)定性。
　?。?）采用HPLC法研究CMCS-hyd-DNR納米粒在不同pH（pH7.4、6.5、5.0）釋放介質(zhì)中的釋藥情況，發(fā)現(xiàn)該納米粒具有明顯的pH敏感性。在模擬溶酶體條件下（PBS，pH5.0），藥物快速釋放，48h內(nèi)，累積釋放量達到65%；而在模擬細胞外基質(zhì)（PBS，pH6.5）以及模擬正常血液（PBS，pH7.4）條件下，相同時間內(nèi)藥物累積釋

5、放量分別不到23%和18%。
　　（4）采用CCK-8法研究該納米系統(tǒng)的細胞毒性，發(fā)現(xiàn)CMCS-hyd-DNR納米粒及free-DNR對腫瘤的抑制作用都表現(xiàn)出良好的劑量依賴性以及時間依賴性。各個孵育時間點，隨著DNR濃度的增加，細胞存活率都有不同程度的下降；在相同濃度時，隨著孵育時間的增加，細胞存活率也有所下降。此外，采用相同方法研究了本次使用的載體材料對細胞的毒性，發(fā)現(xiàn)即使在最高濃度時，細胞存活率依然在90%以上，表明該載體材料