N-硬脂酸-o-羧甲基殼聚糖衍生物自組裝納米載藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、兩親性聚合物在水性介質(zhì)中能通過(guò)自組裝方式形成納米膠束，該類(lèi)膠束具有獨(dú)特的核-殼結(jié)構(gòu)及體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)和主體穩(wěn)定等特點(diǎn);且由于具有增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng)(Enhanced Permeability and Retention Effect，EPR)，該類(lèi)聚合物膠束能在腫瘤病變部位富集，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的“被動(dòng)靶向”作用，將其作為抗腫瘤藥物載體，是提高藥物療效，降低藥物毒副作用的有效策略之一。O-羧甲基殼聚糖(O-carboxyl methyl chit

2、osan，CMC)是一種水溶性殼聚糖衍生物，保留了殼聚糖生物相容性好、可生物降解、無(wú)免疫原性、無(wú)毒性等獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，將其疏水改性后形成兩親性殼聚糖，具有兩親性質(zhì)，在一定條件下能自組裝形成納米膠束，可作為包載疏水性藥物的理想納米藥物載體。
　　本文從O-CMC氨基端引入硬脂酸(stearic acid，SA)合成SA-CMC聚合物，考察其在水性介質(zhì)中的兩親性及臨界聚集濃度(critical aggregation concentrati

3、on，CAC)，以紫杉醇(paclitaxel，PTX)為模型藥物考察其對(duì)疏水藥物的包載和釋放行為;觀察PTX載藥納米粒(PTX-SA-CMC NPs)對(duì)腫瘤的靶向性及體內(nèi)外抗腫瘤效應(yīng)，初步觀察其毒性，綜合評(píng)價(jià)其作為抗腫瘤靶向藥物載體的可行性。主要研究成果如下:
　　1.以EDC為偶聯(lián)劑，將SA接枝到O-CMC的氨基上，一步法合成了SA-CMC的共聚物;采用紅外光譜(FTIR)、氫核磁共振(1HNMR)等手段對(duì)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。

4、通過(guò)控制SA和CMC的投料比，合成三種不同取代度(degreeof substitution，DS)的聚合物。三硝基苯磺酸(2，4，6-trinitribenzenesulfonic acid，TNBS)法檢測(cè)結(jié)果:三種聚合物的SA取代度分別為7.3％、13.8％和19.5％。
　　2.芘熒光探針?lè)z測(cè)結(jié)果表明，SA-CMC衍生物具有兩親性，在水介質(zhì)中能自組裝形成納米膠束，三種聚合物的CAC分別為0.0212、0.0117和0.0

5、098mg/mL。探頭超聲法制備了SA-CMC自聚集納米膠束(SA-CMC NPs)。透射電鏡(TEM)觀察結(jié)果表明，SA-CMC NPs呈球狀，形態(tài)規(guī)則，平均粒徑和CAC均隨著DS的增加而降低;SA-CMC NPs的Zeta-電位為負(fù)值，表明帶負(fù)電荷的羧甲基位于納米膠束表面，Zeta-電位的絕對(duì)值隨著SA的DS增加而降低。自聚集的SA-CMC NPs為“多核模型”結(jié)構(gòu)。
　　3.超聲透析法制備了載PTX的自聚集納米膠束(PTX-

6、SA-CMC NPs)，用HPLC法檢測(cè)其載藥量(loading content，LC)和包封率(encapsulation efficiency，EE)分別可達(dá)18.6％和86.2％;隨著藥物配比的增加，PTX-SA-CMC NPs的LC增加，EE降低，粒徑變大。TEM下PTX-SA-CMC NPs呈規(guī)則球形，平均粒徑在106到123 nm之間;PTX從PTX-SA-CMC NPs的釋放呈兩相模式，且隨著LC的增加，PTX的釋放速度減

7、慢，隨著釋放介質(zhì)pH值的降低，PTX釋放的速度增快，72h的累計(jì)釋放量在73％-90％之間。
　　4.制備Cy5.5標(biāo)記的載藥納米膠束(Cy5.5-PTX-SA-CMC NPs)，尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內(nèi)后，采用活體熒光成像技術(shù)追蹤其在體內(nèi)的組織分布。結(jié)果表明，Cy5.5-PTX-SA-CMC NPs在荷瘤裸鼠體內(nèi)具有明顯的腫瘤靶向性，給藥后8h腫瘤部位濃度最高;72h時(shí)腫瘤部位的熒光強(qiáng)度為腎臟、肝臟和肺臟的5倍，脾臟的8.5倍，

8、心臟的34.2倍。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，BEL-7402細(xì)胞以內(nèi)吞的方式實(shí)現(xiàn)對(duì)Cy5.5-PTX-SA-CMC NPs的攝取。
　　5.四甲基氮唑藍(lán)比色(MTT)法研究顯示，PTX-SA-CMC NPs、Cremopher EL-PTX和Cremopher EL均對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，抑制效應(yīng)為CremopherEL-PTX＞PTX-SA-CMC NPs＞Cremopher EL，而SA-CMC NPs對(duì)BEL-7402