磁性納米四氧化三鐵顆粒對(duì)藤黃酸誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響.pdf

1、目的：本課題旨在觀察磁性納米四氧化三鐵顆粒[magnetic nanoparticle of Fe3O4，MNP（Fe3O4）]對(duì)藤黃酸（gambogic acid，GA）誘導(dǎo)的K562和U937白血病細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響，并通過(guò)測(cè)定Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)情況探討可能的機(jī)制，為臨床白血病的治療提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法（1）應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法分析單獨(dú)及

2、聯(lián)合應(yīng)用MNP（Fe3O4）和GA對(duì)K562和U937細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。（2）應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）分別檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用MNP（Fe3O4）和GA后K562和U937細(xì)胞的凋亡率。（3）采用普通光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡觀察藥物作用前后K562和U937細(xì)胞的形態(tài)特征。（4）采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real time reverse transcript polymerase chain react

3、ion，Real time RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（western blot，WB）檢測(cè)藥物作用前后Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的mRNA和蛋白水平。
　　 結(jié)果（1）MTT結(jié)果顯示：①GA對(duì)K562和U937細(xì)胞的抑制作用有濃度和時(shí)間依賴性，作用48h的IC50值分別為1.13mg/L和0.41mg/L；②20mg/L濃度以下的MNP（Fe3O4）對(duì)U937細(xì)胞無(wú)明顯生長(zhǎng)抑制作用

4、，與空白對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；③GA與5～20mg/L MNP（Fe3O4）聯(lián)合應(yīng)用后，K562和U937細(xì)胞的生長(zhǎng)較單用GA不同程度受抑，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），其中GA與10mg/L MNP（Fe3O4）聯(lián)合應(yīng)用使K562和U937細(xì)胞48h的IC50值分別降為0.72mg/L和0.23mg/L。（2）流式結(jié)果表明：①單用MNP（Fe3O4）時(shí)K562和U937細(xì)胞凋亡率分別為7.1％±3.23％和6

5、.2％±1.7％，較空白對(duì)照組（6.1％±1.67％和5.03％±0.13％）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；②GA單用及聯(lián)合MNP（Fe3O4）應(yīng)用時(shí)K562細(xì)胞的凋亡率分別為35.2％±3.37％及48.7％±1.47％，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；③GA單用及聯(lián)合MNP（Fe3O4）應(yīng)用時(shí)U937細(xì)胞的凋亡率分別為35.05％±3.25％及54.25％±2.45％，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。（3）小劑量

6、GA（0.6mg/L、0.2mg/L）分別聯(lián)合10mg/L MNP（Fe3O4）作用于K562和U937細(xì)胞48h后，光鏡下均可見細(xì)胞胞體固縮、核固縮、核碎裂及凋亡小體形成等典型的凋亡形態(tài)改變，熒光顯微鏡下均可見大量細(xì)胞染色質(zhì)高度濃聚并邊緣化、核碎裂、碎片狀非均質(zhì)熒光增強(qiáng)等凋亡細(xì)胞核熒光改變；而大劑量GA（6mg/L）單獨(dú)作用于K562和U937細(xì)胞48h后細(xì)胞呈現(xiàn)胞體高度腫脹、胞膜破裂、內(nèi)容物溶解并釋放等壞死改變。（3）MNP（Fe3

7、O4）與GA聯(lián)合作用于K562和U937細(xì)胞48h后，Bcl-2、NF-κB和Survivin mRNA和蛋白水平明顯下調(diào)，Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平明顯上調(diào)，與單用GA相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　 結(jié)論（1）MNP（Fe3O4）單獨(dú)處理K562和U937細(xì)胞對(duì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)、明顯影響，且不能有效促進(jìn)K562和U937細(xì)胞凋亡；（2）GA與MNP（Fe3O4）聯(lián)合應(yīng)用后可發(fā)揮更大的細(xì)胞毒作用；（